Содержание

Регенерация зубов у взрослых людей

03.01.21

В будущем возможен процесс регенерации зубов у людей (сейчас на всю жизнь человек получает два набора зубов).

Американские биологи изучали, как зубы и вкусовые рецепторы вырастают в эмбрионах рыб из одних и тех же эпителиальных тканей. У рыб, в отличие от людей, отсутствует язык, и вкусовые сосочки перемежаются с зубами.

Различные виды цихлид, живущие в озере Малави, приспособились к несовместимым условиям среды. Одни рыбы питаются планктоном, заглатывая его целиком, — зубы им почти не нужны. Другие отщипывают водоросли с камней: для этого нужны и зубы, и многочисленные вкусовые рецепторы (чтобы отличать полезные водоросли от вредных).

Ученые скрестили цихлид двух родственных видов и уже на втором поколении гибридов определили генетические различия, отвечающие за плотность и концентрацию обоих элементов. Кроме того, они нашли несколько общих генов, связанных с

развитием зубов и вкусовых рецепторов у мышей.

Погружая эмбрионы рыб в химические растворы, биологи научились манипулировать развитием тканей, ускоряя развитие зубов или рецепторов. Эти сдвиги произошли уже на пятый-шестой день жизни плода (когда челюсти только начинают формироваться).

Несмотря на кардинальные различия в анатомии, два типа объектов возникают в одной и той же эпителиальной ткани формирующихся челюстей. Правильные химические сигналы могут заставить зубы регенерироваться из этой ткани и у людей, считают ученые.

«Мы и не думали найти такую гибкость в развитии столь различных структур. В конечном счете это означает, что эпителий во рту человека может быть не менее гибким и податливым. Мы попытаемся заставить его вырабатывать как зубы, так и вкусовые рецепторы. В этом направлении движутся наши исследования», — заявил соавтор статьи Тодд Стрилмэн (Todd Streelman).

Однако ученый предупреждает, что вырастить новые зубы будет недостаточно — не менее важно понять, как в этих органах формируются нервы и кровеносные сосуды, без которых они не могут функционировать.

Lenta.ru

<< Назад

Выращивание новых зубов. Выращивание зуба.Биоинженерный зуб. Выращиванию зубов в России.Япония вырастила зуб. Исследования выращивания зуба

Чтобы лучше разглядеть новый зуб, учёные «подсветили» его зелёным флуоресцентным белком (GFP). В результате в ультрафиолетовом свете он становится заметным в полости рта (фото Takashi Tsuji/Tokyo University of Science).

И хотя методика опробована только на лабораторных мышах, ученые надеются в перспективе избавить и людей от пересадки донорских органов или вживления зубных протезов.

Исследователи из нескольких научных центров Японии успешно разрешили одну из сложнейших задач, стоящих перед медициной, и вырастили из маленького кусочка особым образом обработанной ткани новый резец. Им удалось получить живой и работоспособный орган из нескольких клеток. В перспективе вместо металлокерамических имплантатов у пациентов, возможно, удастся добиться роста своих полноценных зубов

.

Сверхзадача выращивания зуба

На первый взгляд получение новых органов из нескольких клеток представляется вполне естественным процессом: в ходе развития организма любой орган вырастает. Так, например, молочные зубы в определенном возрасте заменяются у человека на коренные. А что мешает повторить этот процесс еще раз? Тем более есть виды животных, у которых смена зубов идет непрерывно: например, потеря зуба для акул вообще не является трагедией.

Однако следует учитывать, что рост нового зуба или любого иного органа проходит в окружении других тканей. Кроме того, зуб имеет сложное строение, и рост, к примеру, эмали не должен опережать роста кровеносных сосудов и нервов внутри корней зуба. Развитие любого органа, таким образом, требует согласованной миграции клеток: на определенном этапе их деление должно прекратиться или замедлиться, а каждая клетка приобрести свою специализацию.

Еще одна проблема подстерегает растущий орган со стороны иммунной системы. При пересадке чужих клеток организм может распознать их как чужеродные и уничтожить как потенциально опасные. Пациенты, которым пересадили ткани от другого человека, вынуждены длительно принимать препараты, снижающие иммунитет, причем в ряде случаев побочные эффекты от иммунодепрессантов угрожают жизни.

Биоинженерия выращивания зубов

Новый зуб японские исследователи выращивали из небольшой группы клеток, полученной в результате сложных манипуляций со стволовыми клетками мыши. Соединив внутри капли специального геля два разных вида стволовых клеток и подвергнув их дополнительной обработке, ученые сначала получили зародыш будущего зуба.

Далее смесь из клеток двух типов была помещена в лунку, оставшуюся у мыши на месте ранее удаленного под наркозом резца. Для отслеживания за растущей тканью добавили в клетки и ген зеленого флуоресцентного белка. Флуоресцентный белок позволял видеть, куда именно мигрировали клетки искусственного зуба, и убедиться в том, что наряду с зубами у грызунов не появилось каких-нибудь новообразований.

Результат выращивания зубов

В журнале Proceedings of the National Academy of Sciences ученые опубликовали результаты многочисленных проверок нового зуба. На рентгеновских снимках и фотографиях он не отличается от обычных, а по прочности не уступает собственным зубам мыши. У «новичка» оказалась столь же крепкая эмаль, и он так же прочно укрепился в челюсти, сохранив естественный уровень чувствительности: внутри зуба проросли нервы и кровеносные сосуды.

Как говорят исследователи, их работа обеспечивает если не получение новых зубов в стоматологических клиниках, то как минимум лабораторную модель для дальнейших поисков методов выращивания новых зубов. Кроме того, прогресс в области регенеративной медицины позволяет надеяться, что в будущем станет возможным выращивать не только зубы.

Мыши, потерявшие зубы из-за травмы, болезни или неправильного лечения, теперь могут не беспокоиться. Им не надо будет тратиться на

имплантаты и мосты. Юрким животным японские учёные могут теперь вырастить новые полноценные коренные зубы. А что же человек?

Внушительного прогресса добилась группа Такаси Цудзи (Takashi Tsuji) из Токийского университета наук (Tokyo University of Science). Ранее японские исследователи научились выращивать зародыши зубов (в поперечнике около 500 микрометров) и даже внедрили их в дёсны грызунов.

Однако только сейчас они смогли усовершенствовать процесс настолько, что из зародыша вырастал полноценный коренной зуб (для верности эксперимент повторили несколько раз).

«У каждого выращенного зуба всё было на месте: эмаль, дентин, пульпа, кровеносные сосуды и нервные волокна, головка и корни», — рассказывает доктор Кадзухиса Накао (Kazuhisa Nakao). Кстати, если разнообразные головки зубов получать ранее удавалось, то корни выращены впервые.

Пятидневный зародыш зуба был помещён в десну (сверху), через 36 суток он прорезался (в середине) и полностью вырос через 49 дней (внизу) (фото Takashi Tsuji/Tokyo University of Science).

Новые зубы отлично справлялись с любой пищей мышек, отмечают авторы в своей статье, опубликованной в открытом доступе в PNAS.

Для создания зародыша, как и прежде, использовались мезенхимальные и эпителиальные клетки, полученные из стволовых клеток эмбрионов мыши. Пока это единственный источник полноценных зубов. Однако в будущем столь необходимые клетки можно будет извлечь и из другого ресурса (получают же стволовые клетки из клеток кожи и зубов мудрости).

Это достижение определённо продвигает науку на шаг вперёд и приближает возможность выращивания зуба у человека. Однако ещё предстоит решить некоторые проблемы, отмечает профессор Масаки Симоно (Masaki Shimono) из Токийского стоматологического колледжа (Tokyo Dental College). Так, необходимо научиться контролировать рост определённых видов зубов, а также положение бугорков на них.

Цудзи же добавляет, что, несмотря на полноценность выращенных зубов, он и его коллеги пока не могут «регулировать» ширину головки, общий размер зуба (они получаются чуть меньше настоящих), скорость роста (у человека в отличие от мышей зубы растут в дёснах годами).

Технология может быть перенесена на человека только лет через 15, но учёные уже сейчас мечтают у будущем разработки. Ведь теоретически метод можно использовать и для создания зародышей других органов на пересадку (сердца,почек,печени и, может быть, даже лёгких).

Вверху показана схема создания и выращивания биоинженерного зуба. Внизу: отличие зубов естественных от выращенных (иллюстрация и фото PNAS).

«Конечная цель всех исследований в области регенеративной медицины создание полностью развитых правильно работающих биоинженерных органов, которые заменят «испорченные» травмой, болезнью или старением», — поясняет Цудзи.

По оценке экспертов, практическое использование технологии станет возможным не ранее чем через пять лет.

Подробный отчет о результатах исследований японских ученых по выращиванию зубов опубликован в официальном научном журнале Национальной академии наук США.

Революционное изобретение в области личной гигиены сделал японский ученый Казуе Ямагаши. Благодаря изобретенной им зубной пасте, уже скоро можно будет забыть о страшных бормашинах стоматологов.

С помощью созданной доктором Ямагаши зубной пасты можно быстро и безболезненно заделывать дырки и трещины в зубах, а также восстанавливать зубную эмаль без применения бормашины, пишет The Daily Telegraph.

Сегодня единственным способом лечения дыр в зубах является установка пломбы. Для этого врач должен высверлить пораженный участок зуба и залить образовавшуюся полость особым раствором. Главный минус этого способа — в процессе уничтожается значительная часть здорового зуба. Также пациент испытывает крайне неприятные ощущения.

Паста доктора Ямагаши решает эту проблему. По своем составу она сходна с зубной эмалью, и ее можно наносить непосредственно на трещину в зубе. Эмаль была получена в результате экспериментов с гидроксил-апатитом — главным компонентом зубов. Сначала содержащаяся в веществе кислота слегка растворяет поверхность треснувшей эмали.

Спустя три минуты паста кристаллизируется, и искусственный материал прочно встраивается в структуру естественной эмали. Паста также имеет сильный антибактериальный эффект.

Тесты, проведенные японскими стоматологами, показывают, что залеченный с помощью волшебной пасты зуб ничем не отличается от здорового. Разница не видна даже под микроскопом.

Какими свойствами обладает человеческая слюна

Человеческая слюна – это биологическая жидкость, которая скапливается в полости рта человека. Слюна обладает большим количеством полезных свойств – от предварительной обработки еды до уничтожения вредоносных бактерий. 

За выработку слюнной жидкости отвечают большие и малые железы, которые находятся под языком, на небе и с внутренней стороны щеки ближе к ушам. В течение двадцати четырех часов у человека может выделяться до полутора литров слюны. 

Свойства слюнной жидкости

Количество и состав жидкости имеют большое значение, так как она обладает рядом полезных качеств:
Участвует в процессе пищеварения

В состав жидкости входят ферменты, которые расщепляют еду еще до того момента, когда она попадает в желудок. Помимо этого, слюна размягчает еду, что делает пищу более комфортной для пережевывания и глотания. 

Влияние на общий иммунитет

Слюна обладает бактерицидным действием. Омывая ротовую полость, она удаляет остатки пищи из межзубных промежутков и уничтожает патогенную микрофлору.  Кроме этого, жидкость увлажняет слизистую полости рта и предотвращает ее высыхание. 

Минерализация 

В своем составе слюнная жидкость здорового человека содержит различные микроэлементы (кальций, фтор), которые способствуют укреплению эмали зубов. Если слюнная жидкость вырабатывается в достаточном количестве, ее хватает для естественного насыщения эмали полезными минералами.

Регенерация

Протромбины и тромбопластины, содержащиеся в слюне, ускоряют процесс свертывания крови. Жидкость способствует остановке кровотечения, заживлению ранок и повреждений.

Поддержание баланса

Человеческая слюна уничтожает кислоты и щелочи, которые негативно влияют на здоровье зубов и полости рта в целом. 

На качество и состав слюны влияет общее состоянье здоровья человека, а также рацион и режим питания. Огромное влияние на ее состав и на наличие в ней полезных элементов оказывает состояние зубов и пародонта. Соблюдение должного ухода за зубами и деснами и систематическое посещение стоматолога поддерживают нормальный состав слюны, который нужен и очень важен для здоровья организма в целом.

Ускоренная регенерация тканей в Челябинске — плазмодент

Беспокоит кровоточивость десен, не слишком приятный запах изо рта?

Процедура ускоренной регенерации тканей десен дает прекрасную возможность не только лечить заболевания пародонта и устранить подвижность зуба, но и восстановить жевательную функцию.

Иногда данную стоматологическую процедуру называют «Плазмодент».

Безопасное лечение десен, как все происходит?

У пациента берется небольшое количество крови. Затем в специальных пробирках она помещается в центрифугу.

В процессе такой обработки происходит отделение жидкой части крови – плазмы.

Плазму вводят непосредственно в проблемное место на десне.

Ускоренная регенерация тканей. Преимущества

Действие этой технологии заключается в том, что активируются все естественные процессы по восстановлению тканей десны, уменьшению количества клеток, вызывающих воспаление.

После проведения этой процедуры у пациентов происходит образование новых соединительных тканей, прорастают капилляры, вследствие чего улучшается обмен веществ и кровоснабжение в деснах, а также повышается в целом местный иммунитет всей полости рта. Как результат, на тканях уменьшается отёк, и десна приобретает свой естественный цвет, не говоря уже о правильной ее форме.

Процедура ускоренной регенерации тканей признана:

Безопасной.

Применяемые инъекции совершенно не токсичны, иммунореактивны.

Они готовятся из плазмы крови самого пациента, которая обогащена тромбоцитами, и не содержат каких-либо других посторонних веществ.

Безболезненной.

Как правило, процедура проводится при местной анестезии, поэтому болезненные ощущения при инъекциях исключены.

Простой и быстрой.

Забор крови занимает до 2 минут, центрифугирование – до 10 минут, введение плазмы в пораженную зону – до 10 минут.

Эффективной.

Кровоточивость десен снижается уже после проведения первой процедуры.

Еще одним преимуществом является то, что этот метод совершенно гипоаллергеннен.

Ускоренная регенерация тканей– область применения

Богатую тромбоцитами плазму, получаемую из крови пациента, вводят непосредственно в поврежденный участок ткани десны, в места, где был установлен имплант или проведена костная пластика. Кроме этого, такое уникальное вещество может использоваться в лунке удаленного зуба, в области синус-лифтинга, установленной мембраны или остеосинтеза.

Плазма содержит не только факторы роста в достаточно высокой концентрации, но гормоны, витамины и белки в их естественной комбинации. Немаловажным является и то, что все компоненты, содержащиеся в ней, являются абсолютно естественными для человека, поэтому не вызывают каких-либо опухолей или других негативных для организма реакций.

В случаях установки импланта такие инъекции плазмы позволяют заметно повысить скорость сращения его с костной тканью.

Процедура «Плазмодент» направлена на активацию скрытых резервов человека, поэтому любое отторжение инъекции организмом полностью исключены.

Возможности

Как бы ни была хороша процедура, никогда не следует забывать, что эффективность и безопасность этой методики напрямую связаны с использованием только сертифицированного оборудования, а также качественного расходного материала.

Все врачи сети стоматологий «Белый Кит», которые предоставляют услугу Плазмодент, а также все необходимое оборудование имеют сертификаты. Поэтому вы можете уверенно обращаться в стоматологические клиники «Белый Кит» за услугой по регенерации тканей десен.

В комплексе с другими методами лечения дёсен процедура по ускоренной регенерации тканей позволит достичь следующих результатов:
  1. Укрепление ткани пародонта
  2. Остановка развития пародонтита
  3. Снятие кровоточивости десны
  4. Устранение запаха изо рта
  5. Предотвращение расшатывания или потери зуба
  6. Стимулирование приживления имплантата и снижения впоследствии риска его отторжения
  7. Уменьшение срока реабилитации после проведенной челюстно-лицевой операции
  8. Профилактика возможных стоматологических заболеваний

Как только вы заметили, что во время чистки зубов начали кровоточить десны или они выглядят воспаленными, незамедлительно обращайтесь к врачу-пародонтологу.

Процедура «Плазмодент» устранит все эти проблемы без боли и всего за несколько сеансов.

Смотрите цены и отзывы на услугу лечение десен в Челябинске.

Направленная тканевая регенерация

Метод направленной тканевой регенерации (НТР) является одним из актуальных способов наращивания костной ткани в челюстно-лицевой хирургии. Эта технология, которая изначально разрабатывалась для пародонтологических операций, на сегодняшний день успешно применяется и в дентальной имплантологии.

Сейчас НТР благодаря своим неоспоримым преимуществам и большим возможностям стала практически самым востребованным вариантом костной пластики. В оригинале метод предполагает использование двух основных компонентов: костнопластического материала и специальной мембраны. Костнопластический материал играет роль своеобразного базиса, на основе которого будет происходить формирование новой костной ткан, а мембрана − это не что иное, как материал, обеспечивающий необходимые условия для этого процесса.

Суть процедуры НТР, которая может выполняться одномоментно на 1-8 зубах, довольно проста. Сначала под местным обезболиванием доктор обнажает пораженный участок зубного корня, очищая его поддесневых отложений и грануляционных тканей при помощи механического ручного инструмента, ультразвука и/или медикаментозных средств. После этого в подготовленные лунки подсыпают искусственный костный материал и, чтобы закрепить его, устанавливают специальную мембрану (резорбируемую (рассасывающуюся) или нерезорбируемую (не рассасывающуюся)).

После данной манипуляции пациенту незамедлительно могут быть установлены дентальные импланты, процесс приживления которых будет идти параллельно с восстановлением костной ткани. Для того чтобы защитить зубы после процедуры накладывают специальную пародонтологическую повязку. Следует отметить, что к НТР никогда не прибегают в период активного воспаления – острый процесс предварительно устраняют. По сути, первым этапом процедуры всегда является тщательная санация ротовой полости, без которой костная пластика не осуществляется ни в одной серьезной клинике.

На текущий момент именно остеопластика посредством направленной тканевой признана самым малотравматичным способом наращивания костной ткани. На полное восстановление кости после проведения описанной процедуры в среднем уходит около полугода. За этот период времени синтетический материал приобретает высокую прочность и вместе с имплантом и натуральной костью челюсти становится единым целым.

Преимущества метода НТР по сравнению с другими технологиями пластики:

  • Меньшая травматичность – не требуется проводить большие разрезы и дополнительную операцию по извлечению костного блока у пациента
  • Многофункциональность – технология применима при разных проблемах с костной челюстью
  • Возможность совмещать операцию с подсадкой блоков, восстановлением костной стружкой
  • Эффективное стимулирование собственной костной ткани человека
  • Можно проводить сразу после удаления или утраты зуба
  • Меньшее количество осложнений, более короткий период реабилитации

К недостаткам процедуры относится в первую очередь то, что одновременно с направленной тканевой регенерацией нельзя провести имплантацию, так как костной ткани в момент установки мембраны еще нет. Кроме того, требуется дополнительная операция по удалению нерезорбируемой мембраны, хотя ее как раз часто совмещают с вживлением импланта. Также следует учитывать, что эта методика довольно сложная и требует от врача особых навыков в изгибе и позиционировании мембраны.


  • Парастаева Наталия Григорьевна

    Врач стоматолог-хирург, имплантолог, врач стоматолог-терапевт

    Опыт работы:

    Парастаева Наталия Григорьевна

  • Коновалов Антон Васильевич

    Главный врач, врач стоматолог-хирург, имплантолог

    Опыт работы:

    Коновалов Антон Васильевич

  • Шульман Станислав Вячеславович

    Ведущий стоматолог-ортопед, имплантолог, врач стоматолог-хирург

    Опыт работы:

    Шульман Станислав Вячеславович

Хирургия и имплантация зубов — Клиника Доктора Северинова

Современная хирургическая стоматология направлена в первую очередь на сохранение зубов пациента, восстановление отсутствующих зубов при помощи имплантации и дальнейшего их протезирования.

Если нет возможности сохранить больной зуб, хирурги проводят его удаление. При удалении они стараются по возможности сохранить объём костной ткани, чтобы в дальнейшем провести успешную имплантацию. Удаление и имплантация благодаря современным обезболивающим средствам стали совершенно безболезненными процедурами. Вид анестезии подбирается для каждого человека индивидуально, учитываются его аллергические реакции и сопутствующие заболевания.

В некоторых случаях сразу же после удаления проводится одномоментная имплантация. При успешном приживлении имплантата осуществляется протезирование — на имплантат устанавливают коронку.

Даже при полной утрате зубов в наше время можно избежать съёмного протезирования. При недостаточном объёме костной ткани хирург проводит операцию для увеличения её объёма, которая позволит в дальнейшем установить имплантаты и мосты с опорой на них. Для решения этой проблемы проводятся операции для наращивания объёма ткани – костная пластика, тканевая регенерация или синус-лифтинг (в зависимости от причины уменьшения объёма).

Недостаток ткани может возникнуть из-за анатомических особенностей строения челюсти или удаления зуба несколько лет назад без последующей имплантации.

Тканевая регенерация — это подсадка костной ткани в челюсть для увеличения её объёма. При этом используется стружка из биоматериала пациента или специальный порошок. Объём обычно наращивается в местах, где ранее были удалены зубы. На месте удаления кость атрофируется, рассасывается, поэтому при имплантации спустя несколько лет может потребоваться хирургическое вмешательство для того, чтобы восстановить прежний объём кости. Места для вживления имплантата при атрофии будет недостаточно без проведения пластики.

Операция по наращиванию кости в области верхнечелюстной пазухи называется синус-лифтинг. С помощью неё увеличивается объём кости на верхней челюсти по высоте за счёт подъёма дна пазухи. Продолжительность процедуры — около часа. Имплантация может осуществляться одновременно с синус-лифтингом или спустя несколько месяцев, после заживления и образования новой ткани. При проведении синус-лифтинга применяется местная анестезия, благодаря которой процедура становится для пациента безболезненной.

Для того, чтобы избежать рассасывания костной ткани, хирурги нашей клиники рекомендуют выполнять имплантацию сразу или спустя несколько месяцев после удаления зуба. Но и в случае необходимости операции современная хирургия позволяет успешно осуществить протезирование после достижения нужного объёма тканей.

Имплантация применяется для восстановления отсутствующих в полости рта зубов. В кость челюсти на место отсутствующего зуб вживляется имплантат (искусственный корень), сделанный из сплава на основе титана. Успешное приживление зависит в том числе от качества материала для имплантата, и от профессионализма врача.

Имплантат состоит из двух частей: внутренняя часть, которая ввинчивается в кость, и внешняя (абатмент), находящая над десной. После установки искусственного корня сверху обычно надевается временна коронка (особенно если зуб находится в зоне улыбки). После того, как имплантат приживётся, устанавливается постоянная коронка.

В нашей клинике используются высококачественные имплантаты, приживляемость которых составляет 98%. Материал коронки, которая устанавливается на имплантат, может быть любой- металлокерамика, керамика или диоксид циркония. Выбор осуществляется совместно пациентом и врачом с учётом пожеланий пациента и его бюджета, а также особенностей организма, наличия аллергических реакций. Возможна экспресс-имплантация — установка имплантата и протезирование за одно посещение.

Удаление зубов наиболее частая операция, осуществляемая стоматологом-хирургом. Перед этой операцией в нашей клинике проводится обязательная диагностика: делается рентгеновский снимок, позволяющий определить количество корней и их положение в челюсти. Рентген-диагностика позволяет провести операцию наименее травматичным и наиболее быстрым способом.

В каких случаях требуется удаление зуба? Часто удалению подлежат так называемые «зубы мудрости» — восьмые. Челюсть современного человека стала более узкой, и восьмёрки часто вырастают неправильно, нарушая прикус. Они почти не участвуют в жевании, но при этом всё равно могут поражаться кариесом. При ортодонтическом лечении и установке брекет-системы восьмёрки в большинстве случаев тоже удаляются.

Иногда зубы вырастают не на своём месте или прорезаются не полностью, мешая при этом другим зубам и не участвуя в процессе жевания. При невозможности поставить их на место с помощью ортодонтического лечения производится удаление. Единственное исключение — ретенированные или дистопированные клыки. Клыки имеют очень длинный корень, достигающий носовых пазух, удаление их может нарушить прикус. Поэтому стоматологи обычно борются за «тройки» до последнего и не спешат от них избавляться.

Удаление проводится и при невозможности проведения терапевтического лечения (при сильном разрушении, трещине или переломе корня). В этом случае рекомендуется не затягивать с имплантацией, чтобы не допустить рассасывания костной ткани.

Регенерация /выращивание/ новых зубов — реальность: vrabac — LiveJournal

В этой статье собраны свидетельства регенерации (выращивания) новых зубов, которые просочились в СМИ, а также дано общее описание методик, которые предлагают различные авторы для того, чтобы вырастить новые зубы, восстановить удалённые и больные зубы.
Вот несколько кратких заголовков из материалов, свидетельствующих об этом феномене.
«…Михаил, вчера я смотрела репортаж по ТВ о бабушке, которая в 70 лет обнаружила, что у нее третий раз за жизнь начали меняться зубы…»
«…В соседнем селе знахарка полосканием рта раствором прополиса и мысленным представлением учит людей наращивать эмаль на поврежденных зубах…».
«…Врачи Дрожжановской райбольницы не могли поверить своим глазам, когда их подопечная Мария Ефимовна Васильева широко раскрыла рот. Надо же — у 104-летней жительницы деревни Чувашское Дрожжаное снова стали… расти зубы!».
«…У 94-летней жительницы Чебоксар Дарьи Андреевой начали резаться новые зубы. Как сообщают специалисты чувашской республиканской стоматологической поликлиники, сейчас у старушки уже прорезался один зуб».
«…У жителя населенного пункта Шаранглу иранской провинции Восточный Азербайджан выросли новые зубы взамен выпавших от старости».
«…Неожиданное счастье привалило Марье Андреевне Цаповаловой, проживающей в Центре реабилитации пенсионеров в Сочи. В сто лет у нее внезапно начали расти новые зубы!».
«…Один из них — 128-летний иранец Бахрам Исмаили. От старости у него выпало всего лишь три зуба, и взамен них выросли новые. Бахрам также не употребляет в пищу мяса. Кроме того, он никогда в жизни не чистил зубы.
Подобный случай произошел с индийским крестьянином Балдевом. У него выросли новые зубы в 110 лет. Балдев — заядлый курильщик. Он жалуется на то, что давно привык держать трубку беззубым ртом и теперь ему неудобно зажимать ее зубами».
«…12-летней французской девчушке Мишель немного не повезло в жизни. Дело в том, что девочка страдает редкой наследственной болезнью. У Мишель выросли акульи зубки, которые постоянно ломаются и вырастают снова. У нее их гораздо больше, чем у обычных людей, причем растут они в несколько рядов. Недавно Мишель вырвали 28 зубов. И все равно их у нее на 31 больше, чем положено».

Цитата из статьи Натальи Аднорал:

Чудо первое: кариеса может и не быть. Подобный феномен наблюдали итальянские стоматологи, посетившие несколько монастырей в Тибете. Из 150 обследованных монахов у 70% не было ни одного больного зуба, а у остальных кариес встречался крайне ограниченно. В чем причина? Отчасти — в особенностях питания. Традиционное меню тибетских монахов включает ячменные лепешки, масло из молока яка, тибетский чай; летом добавляются репа, картофель, морковь, немного риса, исключаются сахар и мясо.

Чудо второе: кариес может быть обращен вспять. Примером тому служат наблюдаемые стоматологами случаи самоизлечения кариеса, когда пораженные ткани вновь становятся прочными, а восстановленный участок зуба приобретает более темный оттенок. И такие случаи отнюдь не единичны. Как это происходит? Клетки-строители обнаруживают повреждения и восстанавливают целостность зуба в той же последовательности, в которой его изначально создавали.

Чудо третье: могут вырасти новые зубы. Называется это «третья смена зубов» и наблюдается у людей весьма преклонного возраста. И хотя у человека нет зачатков третьего поколения зубов, зато есть остатки «вечно юных» тканей, которые вдруг, по не вполне понятным причинам вспоминают о своем предназначении стать зубами и успешно реализуют свой потенциал. Подобные сообщения в последнее время не редкость: у 110-летнего жителя индийского штата Уттар-Прадеш выросли два новых зуба; новые зубы начали резаться у 94-летней жительницы Чебоксар и 104-летней женщины из Татарстана; целых шесть зубов появилось у 85-летней новгородки… Конечно, к сенсациям можно относиться скептически. Если бы… не последние открытия науки.

Научно обоснованное чудо. Группа ученых из американского научно-исследовательского центра штата Техас во главе с доктором Макдугал изучали специальные клетки, производящие зубные ткани (эмаль и дентин). Гены, отвечающие за это производство, активны только в период формирования зуба, а потом выключаются. Ученым удалось эти гены снова «включить» и вырастить полноценный зуб (пока «в пробирке», вне организма)»

Ещё несколько исследований, озвученных СМИ:

 ***Исследователи из Осакского университета готовятся к клиническим испытаниям на людях. По словам ученых, этот метод намного дешевле протезирования, передает ИТАР-ТАСС. Система лечения основана на эффекте генов, которые активизируют рост фибробластов. Это основная клеточная форма соединительной ткани.
Его действие проверили на собаке, у которой предварительно развили тяжелую форму пародонтоза — атрофию тканей вокруг зубов, влекущую их выпадение. Затем пораженные участки обработали веществом, в состав которого входят упомянутые гены и агар-агар — кислотная смесь, обеспечивающая питательную среду для размножения клеток. Спустя шесть недель у пса прорезались клыки. Такой же эффект наблюдался у обезьяны со стесанными до основания зубами.

***Сегодня выращиванием зубов занимается Пол Шарп из Королевского колледжа в Лондоне, он же возглавляет самую известную в этом направлении компанию — Odontis — при Guys госпитале в том же Лондоне. Кроме того в этом направлении работают Forsyth Institute в американском Бостоне и Queen Mary’s College в английском городе Хантс. Из наших ученых в этом направлении работает полтавский генетик из Центра трансплантации криоконсервированных эмбриональных, клеточных и фетоплацентарных тканей Александр Баранович.

***На Украине разработан революционный метод выращивания зубов. Автор идеи — Александр Баранович, учёный-генетик полтавского Центра трансплантации криоконсервированных эмбриональных, клеточных и фетоплацентарных тканей.
Он работает над созданием уникальной методики, с помощью которой беззубые люди могут обновить свою челюсть практически без протезирования. Для этого на месте выпавшего зуба в десну пациента делается инъекция жидкости на основе стволовых клеток выпавших детских молочных зубов. Попав в костную ткань челюсти, клетки начинают размножаться, и за 3-4 месяца вырастает новый зуб.

По словам учёного, похожие эксперименты проводятся и на Западе. Так, английский врач Пол Шарп близок к созданию генетического геля, с помощью которого новый зуб можно будет строго запрограммировать именно на те форму и размер, что были у его выпавшего предшественника.

***Команда исследователей из университета Орегона (США) после длительных поисков нашли ген, ответственный за производство зубной эмали, которая так необходима для зубов. Именно неспособность эмали восстанавливаться приводит к порче зубов у более, чем 8/10 населения земного шара. Вполне возможно, что ученые смогут заставить найденный ген восстанавливать эмаль, покрывая уязвимые места. Таким образом, кариеса и некоторых других зубных болезней удастся избежать.
Ученые назвали новый тип гена Ctip2 — интересно, что он отвечает не только за производство эмали, но и за некоторые функции нашего иммунитета, развитие кожи и нервной системы. Теперь можно к данному списку обязанностей этого гена приписать и восстановление эмали. Результаты исследований опубликованы учеными в авторитетном издании «Proceedings of the National Academy of Sciences».

***Японским ученым из медицинского университета города Хоккайдо удалось разработать уникальную технологию лечения зубов благодаря изобретенному специальному химическому составу, в основу которого входят белки коллаген и фосфофорин.
В ходе эксперимента медики поместили рыхлую белковую массу в поврежденный кариесом зуб подопытной собаки. Всего через два месяца было зафиксировано полное восстановление дентина. Дентин — вещество, которое составляет основу зуба. Японские ученые намерены начать испытания на людях в самые короткие сроки

***Учёным удалось создать технологию, позволяющую вырастить новые зубы на месте выпавших. Миниатюрная система при помощи импульсов ультразвука стимулирует образование зубной ткани и способствует излечению больных зубов, сообщает Eurekalert.
Небольшое беспроводное устройство, запечатанное в кожух из биоматериалов, не причинит пациенту неудобств. Оно крепится в ротовой полости любым удобным способом, например, на «скобках» или в удаляемой коронке. Учёными также был разработан сенсор, который меняет мощность аппарата, дабы импульсы всегда достигали корней зубов. Исследователи надеются представить готовую модель устройства к следующему году.
Устройство предназначено для пациентов с резорбцией корня зуба, которая случается от механического или химического повреждения. Механические повреждения бывают вызваны долгим ношением корректирующих брэкетов. Новый аппарат позволит таким людям носить «скобки» и ни о чём не беспокоиться. Предполагается, что среди этого слоя населения (в Северной Америке брэкеты носят пять миллионов человек) продажи устройства составят 1,4 миллиона экземпляров.
Изначально, испытания технологии были проведены на кроликах. Устройство также позволяет наращивать костную ткань челюсти, что очень поможет детям с гемифациальной микросомией, заболеванием, при котором одна сторона челюсти ребёнка остаётся недоразвитой по отношению к другой. Обычно оно лечится хирургическим путём.

****************************************

У всех техник по восстановлению зубов от различных авторов есть несколько общих моментов, которые перечислены ниже:

1. Мысленная телепортация во времени. Исследователи рекомендуют в своем воображении, либо в медитации перенестись в возраст 13-15 лет, когда все молочные зубы уже ушли, а коренные еще здоровы. Как можно качественнее представить себя в этом времени, возможно с использованием фотографий. Вспомнить как можно больше волнующих моментов из этого периода жизни…
2. Работа с энерго-информационным полем. Цель — вживить или перенести «зародыш» здорового зуба в нужное вам место. По Михаилу Столбову – отдание приказа зубу вырасти. В последующем – постоянная мысленная визуализация красивых, блестящих, белых зубов.
3. Ежедневное, по некоторым методикам ежечасное максимальное внимание к нужному месту, постоянное стимулирование (как физическое, так и психологическое), усиление притока крови, массаж десен зубной щеткой, тренировка челюстей.

Комментарии читателей:


2 года назад вырвали зуб мудрости, сделали рентген, в десне было пусто. Спустя год начал выращивать зуб на том же месте. Сейчас вырастил уже больше половины зуба. Как закончу- приступлю к остальным. Никакой тут тайны нет, у наших предков это было в порядке вещей. Знаю ещё человека, который вырастил зуб.
Вам даже не нужно практик, достаточно доверять себе и верить в результат. Великий плацебо=) А различные практики для того и существуют,что бы настроить Вас на нужную волну (Степан Рудаков)

Лет 15 назад, на Яндекснарод, был форум посвящённый этой проблематике, военные пенсионеры, с плохими сканами фоток своих нарощенных зубов, делились опытом, правда у них там соль была + электричество, с небольшими токами, они таким образом наплавляли зубы, про крепость не помню, но по цвету точно белее родных были (Александр Дворников).

**************************************

Ниже представлен фрагмент из незавершённой книги Михаила Столбова (автор погиб при несчастном случае), где Михаил делится своим опытом выращивания 17 новых зубов.

Все началось в 1978 году, когда я отбывал положенные три года срочной службы на Русском острове. Именно тогда и там мне табуреткой выбили практически все зубы. Тогда я страшно надеялся, что меня тут же комиссуют, но мне за казенный счет в течение недели смастерили вставные челюсти, и оставшиеся 2,5 года из-за своей картавости я был для всех «Шавкой». Вставные челюсти вещь неприятная, но не смертельная… и не к такому привыкают.
За следующие годы я неоднократно менял эти стоматологические протезы на новые и уже смирился со своей судьбой, но некоторое время назад я почти на год оказался «заперт» в сибирской тайге. Там меня настигло заболевание, из-за которого я не мог носить протезы дольше, чем 15-20 минут в день. Любой предмет и даже собственный язык причинял мне боль. Пищу приходилось превращать в кашку и глотать не прожевывая. Процесс приема пищи превратился в муку и затягивался на сорок-шестьдесят минут. Кроме того, я не мог разговаривать! Ведь зубы в содружестве с языком участвуют в образовании звуков Т, Д, З, Н, Р, С, Ц, Ч; а вместе с губами в образовании звуков В и Ф. Благо, в то время в сторожке под Раздольным мне было не с кем разговаривать… Но и спасать меня тоже было некому. Мне было очень больно и страшно. Именно это заставило меня начать искать способы ВЫРАСТИТЬ новые зубы.

На сегодняшний момент у меня 17 (СЕМНАДЦАТЬ!!!) своих новых зубов, которые выросли вопреки всем утверждениям современной медицины. За этот год в тайге произошло очень много различных событий, и я не знаю, что конкретно сыграло роль в возникновении чуда. Поэтому, в своей книге я постараюсь старательно повторить те открытия, которые я совершал в тайге, и описать те действия, которые помогли мне снова стать зубастым.
Я попробую их перечислить и последовательно прописать каждое:
· Меняем мировоззрение – учимся верить в чудеса
· Бросаем курить
· Накапливаем энергию (сбрасываем лишний вес)
· Учимся слушать свое тело
· Учимся слушать свою душу
· Учимся слушать Мир
· Растим зубы

Несколько писем:

«Здравствуйте Михаил! С радостью обнаружил вашу работу по выращиванию зубов в интернете. У меня удалены все зубы, и недавно обнаружил рост двух новых зубов. Не могу объяснить причину этого и пока только наблюдаю за процессом… Очень жду окончания вашей книги. Зубы были удалены полтора года назад полностью и эти два зуба растут ПО НОВОМУ. Серьезной методики у меня нет, за исключением — зарядка воды и упражнение «Жевать — кусать», и формула «Куда мысль, туда энергия, куда энергия, туда кровь.! Мне 46 лет. Александр».

«Два зуба вырастил. Суть результатов в мотивации, по крайней мере у меня так было. Изначально я просто хотел реанимировать зубы, в плане эстетики, но постепенно понял, что просто так они не реагируют. А началось все когда зубы стали жизненно необходимы, стали просто вываливаться из десен.Тогда и появились первые результаты. Боль была неимоверно острая особенно первые 2 дня и когда в некоторых местах пробивалась десна. Появилось 2 зуба, но не на месте старых а рядом, правда без искривления. Другими словами результат — 2 новых зуба и после полугода работы больше результатов не было.»

«Когда у меня вырвали боковой зуб, передние два зуба раздвинулись и между ними получилась очень широкая и некрасивая щербинка. Я из-за этого страшно переживал и комплексовал. Каково же было мое удивление, когда через какое-то время в этой щели ВЫРОС еще один зуб!!!»

«Я бы никогда не поверил! Но, найдя в Нете твои статьи, решил попробовать и вот три дня назад у меня полез новый зуб!!! Я сначала ничего не понял!. Что-то колет язык и все. Вчера я увидел: ползет, зараза!!!»

«Привет, Михаил! Есть у меня один зуб с историей. То есть, давно уже там киста у меня, несколько лет назад мы её усиленно лечили. Сегодня сделали снимок, и выяснилось, что костная ткань между корней восстановилась, чего в принципе не может быть, как мне сказала моя стоматологиня».

Цитаты с форумов:

«Anatoly: Выращивал чисто сознательно. Создавал мыслеобраз зубов там, где их уже не было. За пару месяцев выросло 4 красивых белых, как снег. Но ведь наши дантисты-типичные варвары. Они начали доказывать, что это аномалия, что это зубы мудрости (после 50 лет) и не успел я очухаться, как все 4 моих красавца без анестезии были зверски удалены. Повторная попытка вырастить новые ни к чему не привела. Дело в том, что я пошёл к этим варварам ставить мостик и они мне «доказали», что эти зубы будут не только мешать, но и вредить. А вера в советскую медицину была выше веры в собственные способности, вот и…» http://magov.net/blog/135.html

«Так случилось что я до последнего тянул с лечением зубов всегда веря, что можно обойтись своими силами и даже мне кажется когда-то это получилось — я мысленно «сканировал» челюсти представляя как появляется сила в зубах и увеличивается кровоток, но как то не системно. И вот на месте вырванного в армии зуба вдруг что-то появилось. Я не знал что и думать. С одной стороны в армии могли не полностью удалить зуб и это мог быть остаток корня с другой стороны то что появилось было абсолютно гладким и аккуратным(!!!) Потом вдруг на его поверхности (выступал он на 1-2 мм) появилось пятно которое быстро стало превращаться в кариес. А потом из за другого зуба распухла щека и приперло идти в поликлинику где врач заодно с испорченным зубом вырвала и этот кусочек. На все мои потуги обратить внимание что это может быть не осколок естественно никто не обратил внимание ( да и я был хорош — под уколом да еще панически напуган посещением поликлиники — не особо был настойчив). Короче после того события прошло уже около 4-х лет и я сдался (жевать то уже нечем)».
http://www.e-puzzle.ru/forum/lofiversion/index.php/t350.html

«А вот что мне рассказал один знакомый, бывший халулаевец (одна из бывших элит спецназа в Приморье). Как то он в тайге монаха буддийского повстречал, тот травки искал, раззнакомились. Тот и рассказал, что зубы возможно вырастить, для этого особый настрой нужен (возможно медитация), набор трав определенный, и самое главное три месяца в тайге быть надо. Видимо на природе обязательно (не всем же желающим именно в тайгу Приморскую иль сибирскую ехать). Травы, думаю, нужны, чтоб организм почистить, природа — энергии набраться, медитация — на помыслы чистые, настрой — на рост зубов». http://forum.anastasia.ru/topic_21135_30.html

Практика выращивания новых зубов по методике Сергея Веретенникова

«После проблем со зрением (см. практику восстановления зрения), проблема плохих зубов стоит на втором месте по массовости. Конечно же как и проблема со зрением решается ношением очков, так и проблема с зубами решается их протезированием. Но разве это тоже самое, что хорошие молодые зубы? Конечно же нет.

Природа дала нам возможность менять зубы один раз в детстве и она может давать эту возможность снова и снова, если вновь «включить» этот же самый механизм обновления зубов. Все, что нужно сделать для этого — это знать на какую «кнопочку» нажимать, чтобы Ваше тело понимало, что Вы от него хотите. Сейчас эта функция спит и она будет продолжать спать, пока Вы ее не включите. Повинуясь определённой программе — зубы меняются один раз в детстве, а дальше эта «автоматическая» программа завершается и Вам по необходимости ее нужно запускать самостоятельно своим разумом.

Давайте я коротко опишу как происходит рост первых зубов и затем смена зубов на новые в детстве.

1. Итак, обычно первые зубы появляются около 5-7 месяцев с момента рождения, но еще с 3-4 месяцев ребенок начинает чувствовать процесс «зарождения» зубов в деснах, он все кусает и периодически плачет. Первыми появляются два нижних центральных зуба-резца.
Через некоторое время прорезаются два верхних резца. Обратите внимание на этот важный факт- он будет важен при моём дальнейшем повествовании данной практики.
И дальше с разной периодичностью вырастают резцы по бокам, затем коренные зубы и в конце — клыки. И в самом конце, через ощутимый интервал времени, — задние коренные зубы.

2. Где-то в пределах шестого года начинают вначале качаться, а затем выпадают зубы в том же порядке, как они и появлялись — вначале два нижних резца, затем два верхних и т.д.
Обратите внимание, что весь этот процесс вновь начинается с двух передних резцов.

«Старые» зубы начинают качаться потому что внизу появляются молодые растущие новые зубы — они разрушают корни молочных зубов и расшатывают их, пока те не выпадут. Это простой и понятный процесс. Который мы все хорошо помним благодаря мудрости Природы — она через боль донесла до своих детей память об этом процессе, как бы говоря нам: «Помните Дети, я знаю, что Вам больно, но это единственный способ для того, чтобы Вы запомнили как растут новые зубы, чтобы при желании Вы могли вспомнить это в будущем и вырастить новые, вспомнив об этом».

3. К 12-ти годам зубы полностью обновляются на новые, также реализуется ещё одна программа роста новых зубов в возрасте примерно 18 лет, когда вырастают зубы мудрости. А дальше история знает только «случайное» включение программы роста новых зубов, когда новые зубы начинали расти у пожилых людей, которые тем или иным неосознанным действием «запустили» этот процесс, который ждет своего часа и может быть «запущен» совершенно любым человеком.

Описание практики роста новых зубов

А. Первое, что нужно сделать — это вспомнить как можно больше из всех ощущений, которые сопровождали рост новых зубов в детстве. Это сделать не сложно — т.к. Природа постаралась и дала нам память об этом через боль (все болезненные ощущения являются самыми сильными и запоминаются на долго). Вспомните этот постоянный зуд в деснах, как качаются старые зубы, которые «подталкиваются» снизу растущими молодыми зубами, как Вы стоите перед зеркалом с привязанной к зубу ниткой в попытке победить свой страх, выдернув его и т.д. Вспомните это, потому что это первая «кнопка», которая включит и запустит процесс роста новых зубов.

Б. Теперь я снова верну Вас к описанию, которое давал вверху — а именно к тому месту, где я говорил о том, что первые зубы начинают расти с первых двух нижних резцов и с них же они начинают меняться на новые. Это упорно говорит нам о том, что здесь находится ещё одна из «кнопочек», на которую нужно нажать, чтобы включить процесс регенерации зубов.

В. И третья «кнопка» находится конечно же в нашем сознании. Её мы тоже должны включить на постоянный режим, т.к. всё, что я напишу внизу, постоянно мы делать не сможем (все 24 часа).

1. Итак, я опишу, что конкретно нужно делать. Найдите 10-30 минут для занятий каждый день. Первую треть этого времени думайте о пространстве под каждым зубом, т.е. одновременно под каждым зубов внутри десен. В этом пространстве представляйте маленькие белые зубы, как семена, которые только-только прорастают. Думайте об этих зубах именно как о семенах, т.е. о том, что посажено и уже начинает прорастать. Вспомните (из первого пункта) зуд, который сопровождал рост новых зубов в детстве, как «чесались» зубы, как это было болезненно и т.д.

2. Держите эту концентрацию первую треть практики.

3. Далее не прекращая вышеописанную концентрацию (зубы-семена, зуд в деснах) концентрируйтесь на точке, которая находится под двумя нижними передними резцами (это область примерно около 0.5-0.8 см). По мере концентрации — Вы можете чувствовать давление в этой области, это хорошо.

4. Держите такую концентрацию вторую треть практики.

5. Не прекращая обе концентрации, описанные мной вверху (на деснах и на точке под передними резцами), концентрируйтесь также на области между бровями и немного вглубь (Третий Глаз), проговаривая мысленно примерно следующую фразу «Мои зубы полностью обновляются». При этом держите мыслеформу обновления Ваших зубов, в которой плохие зубы выпадают, а взамен их растут новые молодые зубы.

4.Делать данную практику нужно в течение как минимум месяца. Разумеется, что кому-то может потребоваться меньше времени, а кому-то больше. Поэтому главным критерием здесь является Ваша способность чувствовать себя.

Примечание : Единственной причиной неудачи в данной практике может быть Ваш страх потерять зубы и цепляние за старые. Например такие мысли как «А вдруг все зубы выпадут, а новые не вырастут», «Лучше синица в руке, чем журавль в небе» и т.д.

Источник — http://www.kramola.info/vesti/neobyknovennoe/regeneracija-novyh-zubov-realnost

Полные описания методик выращивания (регенерации) зубов


Регерерация и выращивание зубов — http://probudilis.ru/st/zubi.php
Как вырастить новые зубы — http://youryoga.org/med/new_teeths.htm
ВИДЕО






Комплексный одноклеточный атлас человеческих зубов — ScienceDaily

За последние 30 лет медицинские и стоматологические исследования привлекли большое количество ученых и практиков, работающих над важными для медицины аспектами, включающими сочетание подходов к генетике и регенерации тканей. . Эти разработки в области стволовых клеток и тканевой инженерии предоставили медицинским и стоматологическим исследователям новые знания и породили новые идеи относительно того, как можно улучшить повседневную клиническую практику.Многие исследовательские группы занимаются такими вопросами, как: Как мы можем помочь заживлению поврежденных тканей и органов? Можно ли регенерировать потерянную ткань? Как мы можем создать надежные протоколы, применимые ко всем методам лечения стволовыми клетками?

Использование передовой технологии секвенирования отдельных клеток

Группа исследователей во главе с Тимиосом Митсиадисом, профессором Института биологии полости рта Цюрихского университета, и доктором Андреасом Муром, профессором кафедры биосистемных наук и инженерии Швейцарской высшей технической школы Цюриха, создала первый в мире клеточный атлас зубов человека.Используя передовую технологию секвенирования отдельных клеток, они смогли различить каждую отдельную клетку, которая является частью пульпы зуба и периодонта. «Наше исследование дает беспрецедентное понимание состава этих двух тканей, которые подвержены специфическим зубным и бактериально-связанным патологиям, таким как кариес и пародонтит. И пульпа зуба, и пародонт содержат стволовые клетки, обладающие большим регенеративным потенциалом, — заявляет первый соавтор Пьерфранческо Паджелла, старший научный сотрудник группы Митсиадиса.

Исследование выявило большую клеточную неоднородность в пульпе зуба и периодонте. Неожиданно команда обнаружила, что молекулярные признаки популяций стволовых клеток очень похожи. «Мы думаем, что их различное поведение, возможно, вызвано их своеобразной микросредой», — говорит Пейджелла. Полученные данные свидетельствуют о том, что специфичность микроокружения является потенциальным источником основных функциональных различий стволовых клеток, расположенных в различных отделах зуба.

Возможны новые клеточные методы лечения зубов

Исследование демонстрирует сложность зубных тканей и представляет собой важный вклад в лучшее понимание клеточной и молекулярной идентичности тканей зубов человека. «Одноклеточные подходы могут помочь нам понять взаимодействие пульпы зуба и клеток пародонта, участвующих в иммунных реакциях на бактериальные поражения. Таким образом, анализ одиночных клеток может быть полезен в диагностических целях для поддержки раннего выявления стоматологических заболеваний», — последний автор Тимиос. — объясняет Мициадис.Таким образом, результаты открывают новые возможности для стоматологических терапевтических подходов на основе клеток.

По словам Митсиадиса, эти достижения в стоматологических исследованиях могут привести к более подходящей терапии, успешной регенерации поврежденных частей зубов и даже более точным диагностическим инструментам в случае стоматологических патологий. «Эти инновации являются следствием слияния биоинформатики и современной стоматологии», — заключает он.

Источник истории:

Материалы предоставлены Университетом Цюриха . Примечание. Содержимое можно редактировать по стилю и длине.

ячеек | Бесплатный полнотекстовый | Регенерация зубов у взрослых собак с использованием стволовых клеток пульпы зуба на 3D-печатных каркасах из гидроксиапатита/полимолочной кислоты

4.1. Каркасы, напечатанные на 3D-принтере

В этом исследовании мы разработали проницаемые для жидкости каркасы с альтернативной архитектурой укладки корневого круга и прокладки. Однако высота (~ 180 мкм) и экструдированных линий PLA была выше, чем у нашей установки (100 мкм в высоту), и, таким образом, зазоры между двумя корневыми окружностями были менее 20 мкм.Как правило, поперечное сечение экструдированного полимерного материала с футеровкой имеет овальную форму из-за когезионной силы расплавленных полимерных материалов до их охлаждения до затвердевания. Кроме того, сила тяжести делает сечение овальным, ширина которого больше его высоты. Поток материала из PLA контролировался с помощью g-кода, созданного программой нарезки (Ultimaker Cura 2.7). Следовательно, расчетная площадь поперечного сечения 2,50 × 104 мкм 2 (высота слоя 100 мкм × ширина линии 250 мкм) может быть преобразована в теоретический диаметр круглого сечения экструдированной линии PLA, который составляет 178.41 мкм. В то время как PLA был только что выдавлен из горячего сопла, чтобы сформировать линию, он имел круглое поперечное сечение, прежде чем он вступил в контакт с предыдущим нижним слоем. Затем экструдированный PLA был зажат между соплом и предыдущим слоем под ним из-за того, что высота слоя была установлена ​​​​как 100 мкм. Однако высота овального сечения (~180 мкм) была выше теоретического значения (178,41 мкм) линии PLA с круглым сечением, поэтому фактический расход материала при печати был больше установленного нами значения.Таким образом, зазор и пространство между двумя корневыми окружностями были сжаты во время 3D-печати.

4.2. Покрытие ГК на матриксах
По результатам ТГА-тестов количество ГК, нанесенного на корневое и верхнее кольца Р-каркаса, составило 2,28 и 0,71 мас.% соответственно. Верхнее кольцо было напечатано как плотный объектив, поэтому композит HA/PLA был нанесен только на поверхность. Разработанный корень состоял из чередующейся архитектуры спейсера и корневого круга, поэтому он имел большую площадь поверхности и больше места, чем верхнее кольцо для покрытия композита HA/PLA.Хотя альтернативная архитектура укладки не была хорошо отработана в процессе 3D-печати, каркасы были проницаемы для жидкости, как показано на рисунке 1d, который демонстрирует, что композит HA/PLA проникал в пространство между двумя слоями линий PLA во время погружения. Напечатанный на 3D-принтере PLA (P-каркас без покрытия HA) показал хорошую термостойкость на воздухе, и Td образцов каркаса снизилась, а количество HA увеличилось, как показано на рисунке 1e. Потеря веса от 100 до 200 °C корня и верхнего кольца, покрытых ГК, составила 1.67 и 1,07 мас.%. Перед ТГА-испытанием образцы каркасов с покрытием погружением обрабатывали для удаления растворителя и влаги. Снижение Td от каркаса, напечатанного на 3D-принтере, до корня, покрытого ГК, составило 52,68 °C. Следовательно, потеря веса должна происходить за счет растворителя, поглощаемого линиями PLA, напечатанными на 3D-принтере. Уменьшение Td за счет абсорбированного растворителя уменьшило компактность линий PLA и начало гореть на воздухе при низких температурах. Образец, содержащий более высокое количество ГК, имел большую площадь поверхности для контакта и пропитывания растворителем, что приводило к снижению термической стабильности.Растворитель, абсорбированный биоматериалами во время обработки, может повредить нагруженную клетку, окружающую ткань и орган пациента. Композит ГК/ПЛА с погружением оказался биоразлагаемым и был заменен минерализованной тканью, как показано на рис. 7. Первоначально , проницаемые для жидкости структуры каркасов PLA, напечатанных на 3D-принтере, были заполнены композитом HA / PLA после процесса покрытия погружением. Тем не менее, деградация линейки каркасов PLA, напечатанных на 3D-принтере, оказалась очень медленной. Сообщалось о низкой скорости деградации in vitro чистых каркасов PLA, напечатанных на 3D-принтере в PBS при 37 ° C, что было аналогично нашим выводам [19].Температура стеклования (Tg) PLA составляет около 60 °C, и кристаллы PLA образуются, когда линии экструдированного горячего расплава PLA охлаждаются до затвердевания на нагретой сборочной плите до 60 °C. Как высокая Tg, так и кристалличность PLA препятствуют разложению PLA при температуре ниже Tg PLA [20]. Композит ГА/ПЛА с нанесенным погружением покрытием на поверхности каркасов из ПЛА, напечатанных на 3D-принтере, был сформирован после сушки в вакууме при комнатной температуре, что могло препятствовать кристаллизации фазы ПЛА.Высокое содержание ГА в композите ГА/ПЛА увеличивает площадь поверхности фазы ПЛА. Таким образом, композит HA/PLA с нанесенным погружением показал хорошую биоразлагаемость

. Это было первое исследование, посвященное регенерации зубов у взрослых собак с помощью напечатанных на 3D-принтере каркасов HA/PLA, загруженных стволовыми клетками пульпы зуба. В этом исследовании был использован инновационный и специально разработанный 3D-печатный каркас PLA с аналогичной структурой корневого канала для измерения расстояния между зубами и размера корня, а затем методом инфильтрации был покрыт коллаген и ГК, чтобы способствовать дифференцировке стволовых клеток пульпы зуба.Размер дефекта в месте имплантации можно точно просверлить до проведения эксперимента, чтобы имплантат можно было установить в месте очень плотно и стабильно.

4.3. Оценка

Перед экспериментом и после операции каждую собаку сначала анестезировали, а затем использовали КЛКТ для облучения места имплантации для наблюдения за ходом регенерации зубов, что можно использовать для динамической оценки.

Трехмерное изображение черепно-лицевой структуры, полученное с помощью КЛКТ, позволяет избежать проблемы увеличения плоскостного изображения.После цифровой проявки стоматологических изображений с традиционной пленки доза облучения может быть снижена примерно на 50–75%; однако принципы КЛКТ и традиционной КТ различаются. Последний использует точечный источник для получения конусообразного луча после проникновения в объект. Для изображения на пленке CBCT использует технологию щелей, при которой рентгеновское излучение от источника проходило через линейную щель, превращая луч в веер, а затем проецировалось на датчик для формирования изображения. Трехмерные изображения КЛКТ могут предоставить много диагностической информации, не только получая трехмерные изображения, но также могут быть дополнительно сжаты в двумерные рентгеновские изображения, которые обычно используются.Трубка и детектор вращаются для получения проецируемых изображений под разными углами. Наконец, трехмерное изображение было реконструировано с помощью алгоритма Фельдкампа.

В этом исследовании полихромная маркировка последовательным флуорохромом выполнялась путем подкожных инъекций кальцеина, ализарина и тетрациклина соответственно в каждый момент времени 0, 6, 12, 24, 30, 36 недель после операции последовательно. Метод последовательного мечения флуорохромом с использованием кальцийсвязывающих флуоресцентных красителей широко применялся для решения различных вопросов, касающихся процесса минерализации.Он был прост и эффективен для изучения динамики минерализации в сочетании с простой гистологией [21]. Метки флуорохрома, когда они связаны с ионами кальция, могут быть включены в места минерализации в виде кристаллов гидроксиапатита Ca 5 (PO 4 ) 3 (OH) [22,23]. Это означает, что на этикетке указаны все участки минерализации в организме, включая участки образования кости или отложения дентина, а также гипертрофированные хрящи в пластинке роста.В первые 24–36 ч после введения метка стабилизировалась. Невключенная метка быстро выводилась почками, что приводило к пиковой концентрации в моче от 225 минут у обезьян [24] до 30 минут у мышей [23]. В результате флуоресцентная метка разграничивает фронт минерализации во время введения и может быть обнаружена в гистологических срезах без дальнейшего окрашивания или декальцинации. Вводя различные метки через определенные промежутки времени, можно отслеживать минерализацию во времени.Как правило, эмиссионные спектры тетрациклинов находятся в желтом диапазоне (дихлорид диметилолова [DMTC] имеет оранжево-желтый цвет), зеленые флуорохромы кальцеина, демонстрирующие высокое сродство к кальцию, маркируют более широкую флуоресцентную полосу. Кальцеин имеет высокое сродство к кальцию, что выражается в относительно широкой флуоресцентной полосе [21,22,23,24]. Флуорохромная маркировка позволяет определить время и место начала минерализации, а также направление и скорость минерализации [25,26,27]. В этом исследовании метод внутривенной инъекции концентрированного пентобарбитала натрия для умерщвления собак может эффективно поддерживать характеристики тканей, и было нелегко вызвать деформацию после умерщвления.

В этом исследовании изображения места установки имплантата были откалиброваны с использованием рентгеноконтрастной гуттаперчи для параллельного позиционирования, которую можно использовать для точного позиционирования и вырезания места установки имплантата для оценки.

Для оценки минерализации восстановления тканей использовались различные методы, такие как гистоморфометрия и морфометрический анализ с использованием микро-КТ-реконструкций. Основные морфометрические показатели включают измерение объема минерализованной ткани и общего интересующего объема.Соотношение этих двух показателей называется объемной долей ткани минерализации [28]. Одним из основных результатов настоящего исследования было то, что объемная доля минерализации и число минерализованных тканей были выше в группах, получавших ГК/ФЛА + dDPSC, чем в контрольной группе (ГК/ФЛА+). НОА) группы. Количество минерализованной ткани, толщина структуры и разделение структур основывались на трехмерных расчетах, а именно на методе подгонки сфер, где для измерения толщины сферы подгоняются к объекту, а для разделения — к фону [28]. ].Индекс структурной модели относится к наличию бляшек и стержней в трехмерной структуре, такой как ткань минерализации. Исследования использовали этот индекс и выявили отрицательную корреляцию индекса модели структуры с объемной долей ткани минерализации [29] по сравнению с нашими результатами.

Micro-CT — это технология неразрушающего 3D-изображения, позволяющая четко отображать внутреннюю микроструктуру образца без его разрушения. Существуют три основных аппаратных компонента, в том числе рентгеновская вакуумная трубка, устройство обнаружения и регистрации рентгеновского излучения и устройство поворотного механизма.

Целевой объект был сначала помещен на предметный столик, чтобы он был неподвижен, а рентгеновская вакуумная трубка и детектор приводились во вращение с помощью вращающегося механизма для получения проекционных изображений под разными углами. Наконец, трехмерное изображение было реконструировано с помощью алгоритма Фельдкампа. Самая большая разница между ним и обычной клинической КТ заключалась в чрезвычайно высоком разрешении. Он использует рентгеновскую трубку с микрофокусом, которая отличается от обычной клинической КТ, которая может достигать микрометрового (мкм) уровня. Микро-КТ обычно использует конусный луч.Использование конических лучей позволяет не только получать действительно изотропные объемные изображения, улучшать пространственное разрешение и увеличивать использование лучей, но и скорость получения того же трехмерного изображения намного выше, чем у веерной КТ. Micro-CT может предоставить информацию о геометрии, включая размер выборки, объем и пространственные координаты каждой точки, а также информацию о структуре. Микро-КТ также может предоставить информацию о материале, такую ​​как значение затухания, плотность и пористость образца, или механические параметры, такие как модуль упругости, коэффициент Пуассона и т. д., проанализируйте напряжение и деформацию образца и проведите неразрушающие механические испытания.

4.4. Клинические данные

Мы обнаружили, что экспериментальная группа имплантаций со стволовыми клетками пульпы, загруженными на каркасы, показала большую минерализацию, чем контрольная группа имплантаций без стволовых клеток пульпы.

Выделение и культивирование стволовых клеток пульпы зуба собаки проводилось в соответствии с предыдущим опытом нашей группы в исследовании стволовых клеток пульпы зуба человека.После выделения тканей пульпы зуба собирали и пересевали одноклеточные колонии.

Для уменьшения жертвоприношения животных в эксперименте использовались только две собаки. У каждой собаки для исследования были удалены три зуба (I3, P2 и P4) с обеих сторон нижней челюсти; одна сторона использовалась для экспериментальной группы, а другая — для контрольной группы. В экспериментальной группе три дефекта левой нижней челюсти каждой собаки были трансплантированы стволовыми клетками пульпы зуба, загруженными на 3D-печатные каркасы из HA/PLA, и их общее количество составило шесть.В контрольной группе три дефекта правой нижней челюсти каждой собаки были трансплантированы с помощью 3D-печатного каркаса HA/PLA без клеток, и их общее количество составило шесть. Мы сравнили результаты трансплантации 3D-печатных каркасов HA/PLA со стволовыми клетками пульпы зуба и без них. Использование флуоресцентных красителей, введенных в разные периоды, позволяет определить величину накопления минерализации тканей, чтобы выявить эффект регенерации минерализации тканей. Конечно, минерализованная ткань не представляет собой зубы, а только демонстрирует потенциал дифференцировки стволовых клеток пульпы зуба.В предыдущем исследовании мы использовали клетки зубного зачатка для успешной регенерации корней зубов с пульпой, дентином, цементом и тканями пародонта, при этом каркас полностью рассасывался [2], что может быть связано с большим потенциалом стволовых клеток зубного зачатка. Поскольку получить зародышевые клетки зубов у взрослых непросто, это исследование было разработано для изучения возможности регенерации отсутствующих зубов у взрослых с помощью стволовых клеток пульпы зуба, которые легче получить у взрослых в реальной жизни. В этом исследовании мы обнаружили, что деградация PLA была медленной, поэтому в месте имплантации все еще оставался некоторый материал.Однако было ясно, что добавление стволовых клеток пульпы зуба может способствовать деградации материала и образованию минерализованной ткани. Предыдущие исследования по использованию стволовых клеток пульпы зуба для регенерации зубов также показали, что стволовые клетки зубоподобные ткани группой Гронтоса [4] и др. [5,6,7,8]. Когда DPSC трансплантировали мышам с ослабленным иммунитетом, они образовывали дентиноподобную структуру, выстланную человеческими одонтобластоподобными клетками, которые окружали пульпоподобную интерстициальную ткань [4].Другие исследователи также обнаружили потенциал DPSC для дентиногенеза или регенерации пульпоподобной ткани, но также использовали только мышей в качестве модели на животных [5,8]. Наше исследование является первым исследованием с использованием собак в качестве животных моделей для регенерации зубов стволовыми клетками пульпы зуба с разработанным, напечатанным на 3D-принтере корнем, подобным каркасу HA / PLA. Достижения в регенеративной медицине со стволовыми клетками привели к клиническим испытаниям. Зубные/оральные ткани становятся многообещающими клеточными источниками мезенхимальных стволовых клеток человека. В последнее время клетки, полученные из тканей зубов, стали использовать в клинической практике благодаря их большому потенциалу, легкой доступности и возможности получения малоинвазивными методами [30].Стволовые клетки пульпы зуба (СКПСК) — первые обнаруженные стволовые клетки зубов. DPSC представляют собой стволовые клетки эктодермального происхождения, выделенные из пульпы постоянного зуба человека. Эти клетки происходят из мигрирующих клеток нервного гребня и имеют сходные характеристики с мезенхимальными стволовыми клетками (МСК) [9]. Уже было показано, что они способны дифференцироваться в несколько клонов, таких как одонтобласты, остеоциты/остеобласты, адипоциты, хондроциты и нервные клетки. DPSC расположены периваскулярно и экспрессируют ряд маркеров мезенхимальных стволовых клеток (MSC), таких как CD105, CD146, CD44 и Stro-1 [31].Человеческий зуб состоит из эмали, ткани пульпы, дентина и цемента, и DPSC обладают способностью дифференцироваться во все эти четыре ткани, что делает биозуб потенциальной реальностью. Многие исследования показали, что цитокины/факторы роста, такие как BMP, FGF, SHH, WNT и TNF играют важную роль в развитии зубов. Более того, экспрессия этих цитокинов характеризуется пространственно-временной специфичностью. Аберрантное выражение может привести к аномалиям развития зубов. Пространственно-временной контроль сигналов развития может стать будущим для применения в области регенерации зубов [1].Технология 3D-печати — это технология быстрого прототипирования и аддитивного производства, которая позволяет создавать сложную архитектуру с помощью послойного процесса сборки и с высокой точностью [32]. Гибкость и управляемость 3D-биопечати позволяют создавать сложные и индивидуальные профили высвобождения множества цитокинов для достижения пространственно-временных градиентов, которые регулируют клеточные функции при регенерации тканей или органов [33,34]. Более того, многие исследования способствовали применению технологии 3D-печати в цитокинах с замедленным высвобождением за счет улучшения обработки, развития технологии или возможности комбинаций с другими формами носителей [35,36,37].Регенерация зубов с помощью стволовых клеток пульпы зуба и использование более быстро разлагаемых биоматериалов для 3D-печатных каркасов с эффектами замедленного высвобождения цитокинов/факторов роста также следует рассмотреть для дальнейших исследований.

Новое лекарство для восстановления потерянных зубов

Япония — Зубная фея — желанный гость для любого ребенка, потерявшего зуб. Мало того, что фея оставит небольшой подарок под подушкой, так еще и ребенок может быть уверен в том, что через несколько месяцев у ребенка появится новый зуб. Чего нельзя сказать о взрослых, потерявших зубы.

Однако новое исследование ученых из Киотского университета и Университета Фукуи может дать некоторую надежду. Команда сообщает, что антитело к одному гену — гену-1, связанному с сенсибилизацией матки, или USAG-1 — может стимулировать рост зубов у мышей, страдающих агенезией зубов, врожденным заболеванием. Статья была опубликована в журнале Science Advances.

Хотя в норме во рту взрослого человека 32 зуба, примерно у 1% населения их больше или меньше из-за врожденных заболеваний. Ученые исследовали генетические причины слишком большого количества зубов в качестве подсказки для регенерации зубов у взрослых.

По словам Катсу Такахаши, одного из ведущих авторов исследования и старшего преподавателя Высшей школы медицины Киотского университета, основные молекулы, ответственные за развитие зубов, уже определены.

«Морфогенез отдельных зубов зависит от взаимодействия нескольких молекул, включая BMP, или костный морфогенетический белок, и передачу сигналов Wnt», — говорит Такахаши.

BMP и Wnt участвуют не только в развитии зубов.Они модулируют рост множества органов и тканей задолго до того, как человеческое тело станет размером с изюминку. Следовательно, лекарств, которые непосредственно влияют на их активность, обычно избегают, поскольку побочные эффекты могут повлиять на весь организм.

Предполагая, что нацеливание на факторы, которые противодействуют BMP и Wnt конкретно в развитии зубов, может быть более безопасным, команда рассмотрела ген USAG-1.

«Мы знали, что подавление USAG-1 способствует росту зубов. Чего мы не знали, так это того, будет ли этого достаточно», — добавляет Такахаши.

Поэтому ученые исследовали эффекты нескольких моноклональных антител к USAG-1. Моноклональные антитела обычно используются для лечения рака, артрита и разработки вакцин.

USAG-1 взаимодействует как с BMP, так и с Wnt. В результате некоторые из антител привели к плохой рождаемости и выживаемости мышей, подтверждая важность как BMP, так и Wnt для роста всего тела. Однако одно многообещающее антитело нарушало взаимодействие USAG-1 только с BMP.

Эксперименты с этим антителом показали, что передача сигналов BMP необходима для определения количества зубов у мышей.Более того, одного введения было достаточно, чтобы образовался целый зуб. Последующие эксперименты показали те же преимущества на хорьках.

«Хорьки — дифиодонтные животные с зубами, похожими на человеческие. Наш следующий план — протестировать антитела на других животных, таких как свиньи и собаки», — объясняет Такахаши.

Это первое исследование, демонстрирующее преимущества моноклональных антител в отношении регенерации зубов и обеспечивающее новую терапевтическую основу для клинической проблемы, которую в настоящее время можно решить только с помощью имплантатов и других искусственных средств.

«Обычная тканевая инженерия не подходит для регенерации зубов. Наше исследование показывает, что бесклеточная молекулярная терапия эффективна для широкого спектра врожденных агенезий зубов», — заключает Манабу Сугай из Университета Фукуи, еще один автор исследования.

У мышей с дефицитом USAG-1, антагониста BMP, остаточные молочные резцы выживают и прорезываются как избыточные зубы (Киотский университет/Кацу Такахаши)

Информация о публикации

【DOI】 https://doi.org/10.1126/sciadv.abf1798

【URL-адрес ДОСТУПА КУРЕНАЙ】 http://hdl.handle.net/2433/261703

А. Мурашима-Сугинами, Х. Кисо, Ю. Токита, Э. Михара, Ю. Намбу, Р. Уодзуми, Ю. Табата, К. Бессё, Дж. Такаги, М. Сугай и К. Такахаши (2021). Анти-USAG-1 терапия для регенерации зубов посредством усиленной передачи сигналов BMP. Научные достижения, 7 (7): eabf1798.

Как собственные стволовые клетки организма могут помочь в регенерации зубов

Терапия стволовыми клетками используется во многих областях медицины для облегчения заживления и даже регенерации тканей.Стволовые клетки зубов продемонстрировали многообещающие результаты в решении проблем с зубами и, возможно, даже дают возможность вырастить новые зубы. Это может позволить стоматологам использовать стволовые клетки в зубах для регенерации зубов для восстановительной стоматологии, а не прибегать к зубным протезам или имплантатам. Вот как это работает.

Обзор стволовых клеток

Стволовые клетки встречаются по всему телу и представляют собой особый тип клеток, которые способны дифференцироваться в другие типы клеток и тканей.Это означает, что они действительно могут развиваться в определенный тип клеток или тканей, что делает их бесценными для лечения болезней или помощи телу в исцелении. Существуют различные типы стволовых клеток, но наиболее распространенные в зубах типы называются мезенхимальными стволовыми клетками.

Мезенхимальные стволовые клетки

Мезенхимальные стволовые клетки обычно используются в терапии стволовыми клетками для решения проблем с костной системой. Этот тип клеток может образовывать хрящи, кости или жир, что делает его отличным вариантом для лечения ортопедических заболеваний.Тем не менее, эти клетки могут специализироваться на многих типах клеток, поэтому они могут развиваться в клетки с определенной формой, функциями и тканью, поэтому у них также есть большой потенциал в области стоматологии.

Применение в стоматологии

Существует множество областей применения стоматологических стволовых клеток. Их можно использовать для восстановления ткани пульпы, удаленной из-за инфекции, или для регенерации периодонтальных связок, утраченных в результате заболеваний пародонта. Одним из наиболее многообещающих применений стоматологической терапии стволовыми клетками является регенерация зубов.Используя каркас из натуральных материалов, зуб действительно может вырасти в зубной лунке, а не снаружи зуба, что требует искусственной имплантации.

Сбор стволовых клеток зубов

Основная причина, по которой стволовые клетки зубов становятся предпочтительным источником стволовых клеток, заключается в том, насколько легко их можно получить. Другие стволовые клетки могут потребовать извлечения из костного мозга. Тем не менее, стволовые клетки зубов можно взять из зубов, утраченных естественным путем или в результате удаления зуба стоматологом.Свяжитесь с Tooth Bank сегодня, чтобы узнать больше о сборе и хранении стволовых клеток зубов для будущего использования.

Могут ли аллигаторы раскрыть секрет регенерации человеческих зубов?

У АЛЛИГАТОРА БОЛЕЕ 80 ЗУБОВ , каждый из которых можно заменить до 50 раз в течение жизни! Потенциально, это тысячи зубов! Вы можете подумать: «Вау, это круто… Но почему мы говорим о зубах аллигатора в этом стоматологическом блоге человек ?» Что ж, аллигаторов могут помочь ученым узнать, как стимулировать обновление зубов у людей .

Зубы аллигатора похожи на человеческие

Как и у людей, у аллигаторов хорошо организованные зубы с различными функциями, закрепленные в костных углублениях. Исследования показывают, что у каждого зуба аллигатора есть три части (или фазы) — рабочий зуб, зуб-заменитель (готовый заменить рабочий зуб в случае его потери) и зубная пластинка (полоска ткани, которая, по-видимому, является центром). для развития новых зубов).

Люди похожи, но с одним большим отличием.У нас есть взрослые зубы (это наши «рабочие зубы») и у нас есть зубная пластинка. Чего у нас нет, так это замещающих зубов. В то время как большинство позвоночных могут менять зубы до самой смерти, человеческие зубы меняют себя только один раз. Вопрос на миллион долларов: почему сменные зубы перестают расти после нашего первого взрослого набора?

Секрет может быть в зубной пластинке

Исследователи считают, что зубная пластинка является источником регенерации зубов. Стволовые клетки пластинки стимулируют рост .По какой-то причине наша пластинка отключается, когда появляются взрослые зубы.

Исследователи работают над выделением точных триггеров роста пластинок у аллигаторов, чтобы, возможно, они могли воспроизвести их у людей. Они считают, что нашли «многообещающее белковое соединение», но им еще предстоит проделать большую работу, чтобы создать правильную комбинацию элементов.

Обзор видео

Пока это игра ожидания

Идея регенерации человеческих зубов интересна (вот почему мы ее подняли!), но она не за горами.Так что, тем временем, продолжайте заботиться о своих зубах!

Спасибо, что заглянули к нам в блог! И спасибо за то, что являетесь нашими дорогими пациентами и друзьями.

Децеллюляризованная пародонтальная связка человека для регенерации пародонта

Abstract

Регенерация периодонтальной связки (ПСС) является решающим фактором регенерации тканей пародонта при наличии травмированных и поврежденных зубов. Для регенерации пародонта применялись различные методы, в том числе заменители тканей, биоактивные материалы и синтетические каркасы.Однако все эти методы лечения имели ограниченный успех в структурной и функциональной регенерации тканей пародонта. Для достижения цели полной регенерации пародонта во многих исследованиях оценивалась эффективность децеллюляризованных каркасов, изготовленных с помощью тканевой инженерии. Целью данного исследования было изготовление децеллюляризованного пародонтального каркаса из срезов человеческих зубов и определение его потенциала регенерации. Мы оценили два разных протокола, примененных к срезам зубов, полученных из здоровых третьих моляров человека.Было показано, что каркас внеклеточного матрикса, децеллюляризированный с использованием додецилсульфата натрия и Triton X-100, которые эффективны для удаления ядерных компонентов, сохраняет неповрежденную структуру и состав. Кроме того, децеллюляризованный каркас может поддерживать репопуляцию стволовых клеток PDL вблизи цемента и экспрессировать гены, связанные с цементом и пародонтальной связкой. Эти результаты показывают, что децеллюляризованные каркасы PDL человеческих зубов способны индуцировать пролиферацию и дифференцировку мезенхимальных стволовых клеток, таким образом, обладая регенеративным потенциалом для использования в будущей пародонтальной регенеративной тканевой инженерии.

Образец цитирования: Сон Х., Чон М., Чхве Х.Дж., Ли Х.С., Ким И.Х., Кан С.М. и др. (2019)Децеллюляризованная периодонтальная связка человека для регенерации периодонта. ПЛОС ОДИН 14(8): е0221236. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0221236

Редактор: Gianpaolo Papaccio, Università degli Studi della Campania, ИТАЛИЯ

Получено: 12 мая 2019 г.; Принято: 1 августа 2019 г .; Опубликовано: 15 августа 2019 г.

Авторское право: © 2019 Son et al.Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в рукописи.

Финансирование: Эта работа была поддержана Программой фундаментальных научных исследований через Национальный исследовательский фонд Кореи (NRF), финансируемый Министерством образования (https://ernd.nrf.re.kr/index.do) предоставить NRF-2018R1D1A1B07041657 для JSS и предоставить NRF-2018R1D1A1B07046163 для HJC. Спонсор не участвовал в разработке дизайна исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Регенерация ткани пародонта является целью пародонтологического лечения для обеспечения заживления травмированных зубов. Несколько видов стволовых клеток, таких как стволовые клетки пульпы зуба (DPSC), стволовые клетки апикального сосочка, клетки-предшественники зубных фолликулов, стволовые клетки периодонтальной связки (PDLSC) и стволовые клетки эксфолиированных молочных зубов человека (SHED), были оценены на предмет их полезность в регенерации зубной ткани [1-4].Ткань периодонтальной связки (ПДС) содержит мультипотентные стволовые клетки, обладающие самообновляющейся способностью дифференцироваться в различные типы клеток с образованием ПДС, цемента и альвеолярной кости [5, 6]. Было показано, что стволовые клетки, полученные из клеток PDL, обладают превосходными регенеративными свойствами по сравнению с другими клетками, полученными из клеток соединительной ткани десны и клеток альвеолярной кости [7].

Было предпринято много попыток регенерировать пародонт, например, с использованием инженерии на основе клеток и каркасов, но до сих пор не сообщалось об эффективном методе регенерации тканей пародонта [8–10].Различные попытки, предпринятые для достижения регенерации PDL, имели ограничения, такие как генная терапия, которая, возможно, индуцирует (человеческий) ответ хозяина и онкогенез, нестабильные факторы роста и вероятность отказа биоматериала.

Выбор подходящего материала каркаса имеет решающее значение в тканевой инженерии. Основными функциями каркаса являются поддержание механической целостности, поставка факторов роста, контроль роста клеток и индукция дифференцировки клеток. Обычно используемые каркасы, такие как керамика, синтетические полимеры и природные полимеры, обладают легко регулируемыми механическими свойствами и хорошей воспроизводимостью производства, но они демонстрируют низкую биологическую активность [11].Поскольку каркасы внеклеточного матрикса (ECM), полученные путем децеллюляризации тканей млекопитающих, не проявляют иммунных ответов и по своей природе содержат тканеспецифические факторы, участвующие в росте и дифференцировке клеток [12, 13], они использовались в исследованиях регенеративной медицины и стоматологии. 14]. Клинические продукты, полученные в результате децеллюляризации тканей, в настоящее время используются для замены и реконструкции органов и тканей, включая дерму человека, мочевой пузырь свиньи, перикард человека и клапаны сердца свиньи [15].

Различные исследования пытались применить каркасы в области стоматологии. Каркас ECM пульпы зуба человека, который был успешно децеллюляризирован, способствует пролиферации и дифференцировке аутологичных мезенхимальных стволовых клеток [16]. Также сообщалось об использовании децеллюляризованных конструкций клеточного листа PDL для регенерации периодонта [17, 18]. Было показано, что листы децеллюляризованных клеток PDL человека (dHPDL) поддерживают структурную целостность ECM, сохраняют факторы роста и поддерживают репопуляцию аллогенных клеток in vitro [17].Также было показано, что децеллюляризованные конструкции клеточного листа PDL, которые способствуют дифференцировке PDL и мезенхимальных стволовых клеток, поддерживают прикрепление пародонта в модели пародонтального дефекта у крыс [18]. Однако, хотя применение децеллюляризованной ткани PDL для клеточных пластин было исследовано, использование человеческих зубов, включая твердые ткани, не изучалось.

Протокол децеллюляризации может быть применен к отсроченной реплантации вырванного зуба, аутологичной трансплантации и пародонтальной терапии путем децеллюляризации ткани PDL после рецеллюляризации стволовыми клетками PDL (PDLSC), полученными из ортодонтически удаленных зубов, молочных зубов и сверхкомплектных зубов .Целью данного исследования было применить и оценить протокол децеллюляризации, который может сохранить структурную целостность и эффективно удалить клетки и ДНК, а также проверить потенциал пародонтальной рецеллюляризации модели децеллюляризованного человеческого зуба in vitro.

Материалы и методы

Подготовка образцов срезов зубов и культура клеток

Третьи моляры без кариеса и реставраций были случайным образом отобраны у пациентов в возрасте от 17 до 25 лет в соответствии с утвержденными рекомендациями, установленными Институциональным наблюдательным советом стоматологической больницы Университета Ёнсе (утверждение №№ИРБ 2-2016-0030). Зубы промывали фосфатно-солевым буфером (PBS; Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США) и замораживали при –80°C до использования. После оттаивания при комнатной температуре зубы погружали в 0,5% раствор хлорамина-Т (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США) на 2 часа при 4°C с последующим промыванием в холодной проточной воде. Ткани пульпы удаляли прошивальщиком с зазубринами, а срезы зубов препарировали с помощью прецизионной пилы (IsoMet 1000, Buehler, Lake Buff, IL, USA), как описано ранее (Cordeiro et al.2008). Образцы собирали в холодном PBS и сразу же подвергали процедурам децеллюляризации.

Ранее охарактеризованные PDLSC на пассажах 3–6 использовали в экспериментах по репопуляции в базальной среде для культивирования клеток, включающей альфа-минимальную основную среду (Invitrogen), содержащую 10 % эмбриональной бычьей сыворотки (Invitrogen), 1 % раствор L-глутамина/пенициллина/стрептомицина (Invitrogen ) и 0,2% раствор амфотерицина В (Invitrogen) при 37°C в 5% CO 2 .

Децеллюляризация и репопуляция

На основании обзора литературы и предыдущего исследования [16] в этом исследовании оценивались два протокола децеллюляризации, как описано в таблице 1: протокол I (PI) и протокол II (PII).Все этапы лечения применялись к срезам зубов при комнатной температуре при постоянном осторожном встряхивании образцов в орбитальном шейкере (Sh40, Fine PCR, Gunpo, Gyeonggi, Korea) в присутствии коктейля ингибиторов протеазы (EMD, Millipore, Дармштадт, Германия). . В конце каждого протокола образцы промывали 10% этилендиаминтетрауксусной кислотой (EDTA, Fisher Scientific, Хьюстон, Техас, США) при pH 7,4 в течение 5 минут, после чего следовали три промывания PBS по 10 минут каждое (Invitrogen).

Для репопуляции децеллюляризованных срезов зубов (dHPDL) PDL с плотностью 1×10 7 клеток/мл в коллагене I хвоста крысы (Col I; Corning, Corning, NY, USA) пипетировали непосредственно на dHPDL с использованием PII. или в пустые лунки (контроль) в 12-луночных культуральных планшетах (Corning).Через 1 час в каждую лунку вносили по 1 мл основной питательной среды и меняли ее каждые 3 дня. Клетки культивировали при 37°C в 5% CO 2 в течение либо 2, либо 5 недель.

Количественное определение остаточной ДНК

Сразу же после каждого протокола децеллюляризации образцы (n = 10~15) гомогенизировали и выделяли остаточную ДНК с помощью набора QIAamp DNA Investigator Kit (Qiagen, Валенсия, Калифорния, США) и количественно определяли с помощью спектрофотометра (NanoDrop NE-2000, Thermo Scientific). , Уолтем, Массачусетс, США).

Сканирующая электронная микроскопия

Образцы из контрольной группы, групп PI и PII инкубировали в растворе фиксатора (2% параформальдегида [PFA], 2% глутаральдегида и 0,5% хлорида кальция), а затем постфиксировали в 1% четырехокиси осмия. Затем образцы последовательно дегидратировали в градуированной серии растворов этанола, покрывали платиной и визуализировали с помощью сканирующего электронного микроскопа (СЭМ; Hitachi S-3000N, Hitachi Science Systems, Токио, Япония) при ускоряющем напряжении 20.0 кВ.

Анализ жизнеспособности клеток

Сравнивали выживаемость PDL, посеянных на dHPDL из PII (n = 10), через 2 недели культивирования. dHPDL без посева клеток служил в качестве отрицательного контроля. Образцы инкубировали с набором для подсчета клеток-8 (Dojindo Laboratories, Кумамото, Япония) в течение 1 часа, и количество водорастворимого окрашенного формазана, образованного активностью дегидрогеназ в живых клетках, измеряли с помощью спектрофотометра (микропланшет Benchmark Plus). спектрофотометр, Bio-Rad Laboratories, Геркулес, Калифорния, США) при 450 нм.Все образцы запускали в трехкратной повторности.

Гистологическое и иммуногистохимическое окрашивание

Для гистологического окрашивания срезы зубов с интактными контрольными PDL, dHPDL, полученными из PI и PII, или повторно заселенными децеллюляризованными PDL фиксировали 4% PFA в течение 1 часа, декальцинировали с помощью EDTA (pH 7,4; Fisher Scientific) в течение 6 недель при комнатной температуре, заливали в парафин, делали срезы толщиной 4 мкм и окрашивали гематоксилином и эозином (H&E).

Уровни экспрессии Col I, коллагена XII (Col XII), фибронектина, остеокальцина (OC) и белка цемента 23 (CP23) оценивали с помощью иммуногистохимии (IHC).Протеазу K (Dako, Carpinteria, CA, USA) использовали для извлечения антигена для окрашивания OC и CP23, в то время как для Col I, Col XII и фибронектина такая обработка не проводилась. Вкратце, образцы из контрольной группы и dHPDL, полученные из PI и PII, погружали в 3% перекись водорода на 10 минут для инактивации активности эндогенной пероксидазы, а затем инкубировали с первичным антителом в течение ночи. Первичные антитела представляли собой разведение 1:10000 кроличьего моноклонального антитела против человеческого Col I (ab138492, Abcam, Кембридж, Великобритания), разведение 1:1000 кроличьего поликлонального антитела против человеческого Col XII (sc-68862, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, Калифорния, США), разведение 1:4000 кроличьего поликлонального антитела против фибронектина человека (F3648, Sigma-Aldrich), разведение 1:8000 кроличьего поликлонального антитела против человеческого OC (#AB10911, Millipore, Темекула, Калифорния, США) и Разведение 1:1000 козьего поликлонального антитела против человеческого CP23 (sc-164031, Santa Cruz Biotechnology).Затем срезы инкубировали в течение 20 минут с полимером, меченным пероксидазой хрена, конъюгированным со вторичным кроличьим антителом, в системном наборе EnVision+ (Dako) или в течение 30 минут с набором Vectatain Elite ABC (PK-6105, Vector Laboratories, Burlingame, CA). , США; IgG козы, разведение 1:200). Цвет проявляли с использованием 3,3′-диаминобензидинового субстрата (Dako) и докрашивали раствором гематоксилина Гилла (Merck, Дармштадт, Германия). Отрицательные контрольные срезы окрашивали таким же образом, но без процедуры реакции с первичными антителами.

Флуоресцентное окрашивание

образца PDL были зафиксированы, пермеабилизированы и заблокированы в соответствии с рекомендациями набора Image-iT Fix-Perm (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния, США). Для окрашивания ядер использовали зонды NucBlue Fixed Cell ReadyProbes (Life Technologies). Иммунореактивность визуализировали с помощью конфокального микроскопа (Zeiss LSM 700) в сочетании с программным обеспечением Zen (Carl Zeiss, Нью-Йорк, США).

Анализ полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в режиме реального времени

Через 5 недель посева и культивирования клеток общую РНК экстрагировали из репопуляционных срезов зубов и из PDL, культивируемых на чашках с культурой (контрольная группа), с использованием набора RNeasy Mini Kit (Qiagen) (n = 4 для контрольной группы и n = 12). для каждой экспериментальной группы).РНК (100 нг) подвергали обратной транскрипции для синтеза кДНК с использованием набора премиксов Maxime RT [праймер oligo d(T) 15 ; Intron Biotechnology, Seongnam, Gyeonggi, Korea] в соответствии с инструкциями производителя. Количественный анализ полимеразной цепной реакции (КПЦР) в реальном времени выполняли с помощью SYBR Premix Ex Taq (Takara Bio, Otsu, Japan) и системы полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени (ABI 7300, Applied Biosystems, Карлсбад, Калифорния, США). США) в соответствии с инструкциями производителя. Условия количественной ПЦР: 95°C в течение 10 секунд, затем 40 циклов 95°C в течение 5 секунд и 60°C в течение 30 секунд с последним 5-минутным удлинением при 72°C.Последовательность и размер используемых праймеров приведены в таблице 2. Уровень экспрессии каждого гена нормализовали к уровню GAPDH (ген, кодирующий глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу), а относительные уровни экспрессии исследуемых генов рассчитано по методу 2 –ΔΔCt [19].

Статистический анализ

Все эксперименты проводились как минимум в трех экземплярах. Статистический анализ проводили с помощью SPSS (версия 23.0, Чикаго, Иллинойс, США).Нормальность данных оценивали с помощью критерия Шапиро-Уилка с критерием значимости р<0,05. Критерий Крускала-Уоллиса с последующим апостериорным тестом Бонферрони (поправка Бонферрони; р<0,017) использовали для сравнения содержания остаточной ДНК с критерием значимости р<0,05. U-критерий Манна-Уитни проводили для жизнеспособности клеток после репопуляции и ПЦР с обратной транскрипцией в реальном времени, также с критерием значимости p<0,05.

Результаты

Оценка различных протоколов децеллюляризации PDL человека

Остаточное содержание ядер и ДНК после децеллюляризации PDL было очевидным по сравнению с контрольной группой, не подвергавшейся децеллюляризации (рис. 1A–1C).По сравнению с контрольной группой ядра и ДНК были элиминированы в группах PI и PII, а для PII наблюдалось заметное снижение ДНК примерно до 62,32% (рис. 1A и 1B). Как видно при окрашивании H&E и DAPI (4′,6-диамидино-2-фенилиндол), дисперсные ядра были очевидны для PI (рис. 1A-b и 1A-e), в то время как для PII почти не наблюдалось ядер (рис. 1A-c). и 1А-е). Изображения SEM показали, что некоторые волокна Шарпея были удалены, но они сохранили свою морфологию как в группах PI, так и в группах PII по сравнению с контролем.Плотность волокон Шарпея была сохранена больше для PII, чем для PI (рис. 1C-a и 1C-b).

Рис. 1. Сравнение различных протоколов децеллюляризации тканей пародонта в срезах человеческих зубов.

(A) Остаточные ядра (указатели) отмечены окрашиванием гематоксилином и эозином (H&E) (a–c) и флуоресцентным окрашиванием 4′,6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI) (d–f). В Протоколе II (PII) было удалено больше клеточных ядер, чем в Протоколе I (PI) после децеллюляризации при окрашивании H&E и DAPI.(B) Остаточное общее содержание ДНК после децеллюляризации периодонтальной связки (PDL). Нормальность данных оценивали с помощью критерия Шапиро-Уилка (р<0,05). *p<0,05 в тесте Крускала-Уоллиса с последующим апостериорным тестом Бонферрони (поправка Бонферрони; p<0,017). (C) Сканирование изображений электронной микроскопии различных групп протоколов. Стрелки указывают оставшиеся волокна Шарпея в PDL. Д, дентин. Масштабные линейки: 20 мкм в A(a–c), 50 мкм в A(d–f) и 20 мкм в C.

https://дои.org/10.1371/journal.pone.0221236.g001

Характеристика ECM децеллюляризованного PDL

Окрашивание

IHC образцов для PI и PII показало, что Col I был почти интактным по сравнению с контрольной группой (рис. 2A–2C). Фибронектин был заметно снижен для PI и PII (рис. 2G-2I). Col XII был снижен для PI, но повышен для PII по сравнению с контролем (рис. 2D-2F).

Потенциал рецеллюляризации человеческих PDLSCs в децеллюляризованных PDL

PDLSC были жизнеспособны через 2 недели посева PDLSC на децеллюляризованный каркас для PII с последующим культивированием (рис. 3).Клетки PDL были повторно заселены на децеллюляризированном каркасе при окрашивании H&E и трихромом Массона. Иммуноокрашивание гистологических срезов для OC показало положительное окрашивание клеток PDL, прилегающих к цементу, а также было обнаружено значительное окрашивание CP23 (рис. 3B).

Рис. 3. Характеристика децеллюляризованной периодонтальной связки PDL человека (dHPDL), рецеллюляризованной стволовыми клетками PDL (PDLSC).

(A) Жизнеспособность клеток для PII после рецеллюляризации. PDLSC, повторно заселенные на dHPDL при применении PII, были жизнеспособны по сравнению с контрольной группой.Для оценки жизнеспособности клеток использовали U-критерий Манна-Уитни (*p<0,05). (B) PDLSC, посеянные на децеллюляризованных срезах зубов в PII, заселились и инфильтрировались в направлении цемента (черные стрелки) при окрашивании H&E и трихромом Массона (MT). PDLSC экспрессировали остеокальцин (OC) и белок цемента 23 (CP23) рядом с цементом (красные стрелки) в рецеллюляризованных срезах человеческих зубов при окрашивании IHC. С, цемент. Шкала баров: 20 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0221236.g003

Дифференциация PDLSC человека в децеллюляризованных PDL

ПЦР в реальном времени была проведена для оценки экспрессии генов маркеров цемента/PDL (таблица 2) с помощью PDLSC, повторно заселенных на децеллюляризованных каркасах PDL срезов зубов.Уровни экспрессии щелочной фосфатазы (ALP), CP23 и OC значительно повышались после рецеллюляризации в 5,61 ± 0,70, 1,96 ± 0,30 и 275,87 ± 201,47 раз (среднее значение ± стандартное отклонение) соответственно. Col XII также активировался (в 1,46 ± 0,24 раза), но это изменение не было статистически значимым (рис. 4).

Рис. 4. Анализ экспрессии генов в группе рецеллюляризованных PDL человека с использованием количественной полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени.

PDLSC были высеяны в контрольной группе или в группе децеллюляризации с использованием PII.*p<0,05 для щелочной фосфатазы (ЩФ) в U-критерии Манна-Уитни; *p<0,05 для CP23 и OC в критерии Стьюдента.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0221236.g004

Обсуждение

Протоколы децеллюляризации применялись к различным тканям и органам для изготовления биоактивного каркаса ВКМ, который мог бы полностью удалять клетки и клеточные компоненты, не затрагивая ВКМ [20–22]. Неполностью децеллюляризованная ткань может индуцировать иммунный ответ [23, 24], в то время как подходящим образом сконструированный каркас ткани не вызывает иммунного ответа in vivo [25].Настоящее исследование децеллюляризировало PDL в срезах человеческих зубов для оценки эффективности удаления ядер и ДНК при сохранении их нативной структуры и состава. Кроме того, потенциал рецеллюляризации децеллюляризованного каркаса PDL оценивали с помощью ПЦР в реальном времени с помощью маркеров тканей пародонта.

Успешное применение методов децеллюляризации может зависеть от многих факторов, включая типы тканей и органов, а также толщину, плотность и клеточность ткани [26].Предыдущие исследования показали, что использование NH 4 OH и Triton X-100 может успешно удалять клеточные компоненты [17, 26]. Децеллюляризация с помощью 1% Triton X-100 и 1% додецилсульфата натрия (SDS) , используемых в PII в настоящем исследовании, была эффективна в отношении передней крестообразной связки свиньи и почки обезьяны [27, 28]. Различные методы с использованием NH 4 OH, Triton X-100, гипертонического буфера и SDS недавно были применены к ткани пульпы зуба человека [16], но клинических исследований децеллюляризации PDL, полученного из срезов зубов человека, не проводилось.Мы применили комбинацию NH 4 OH, Triton X-100 и SDS, которая продемонстрировала эффективную децеллюляризацию по сравнению с другими комбинациями агентов, использованных в предыдущих исследованиях.

В настоящем исследовании PII удалил до 62,32% содержимого ДНК, что больше, чем для PI. По-видимому, SDS, использованный в PII, обеспечивал более полное удаление ядерных остатков, чем Triton X-100 [27, 28]. Ионные детергенты, такие как SDS, более разрушительны для структуры тканей, чем Triton X-100 [29].Однако эффективность удаления в настоящем исследовании была ниже, чем в предыдущих исследованиях: не менее 90% ДНК хозяина удалялось при обработке SDS в тканях и органах, включая предплечье крысы [30], роговицу свиньи [31], сердечный клапан свиньи [32]. ), человеческая вена [33] и человеческое сердце [34]. Похоже, что специфические характеристики структуры зуба, включая входящие в его состав твердые ткани, приводят к меньшей элиминации твердых тканей, поэтому в будущем необходимо исследовать дополнительные агенты для полного удаления ДНК (например, ДНКазу).

Волокна Шарпея, которые являются основными волокнами PDL, функционирующими как при прикреплении зубов, так и при регенерации PDL, имеют более плотное расположение в PII. Для оценки целостности децеллюляризованного ВКМ следует оценивать структурные белки, такие как коллаген, фибронектин и ламинин, а также гликозаминогликаны [35]. Хотя фибронектин был заметно снижен для PI и PII, Col I (который является преобладающим типом коллагена в PDL) сохранялся при окрашивании IHC, тогда как Col XII увеличивался для PII.Эти результаты могут быть связаны с вовлечением зубов в зрелую/функциональную стадию PDL по сравнению с развивающимися стадиями, в то время как экспрессия Col I уменьшается с возрастом [10, 36]. Кроме того, Col XII отвечает за организацию коллагеновых волокон в ответ на механическую нагрузку в зрелых PDL [36]. Результаты настоящего анализа SEM и IHC показали, что использование SDS и Triton X-100 сохранило волокнистую сеть коллагена без какой-либо заметной потери структурных белков.Это согласуется с [13], демонстрирующей эффективность 1% SDS и 1% Triton X-100 для децеллюляризации створок сердечного клапана при сохранении целостности каркаса ECM.

В нескольких исследованиях оценивалось влияние децеллюляризованного каркаса на экспрессию генов и дифференцировку клеток. Маркеры экспрессии генов, выбранные в настоящем исследовании, имеют отношение к заживлению ран и регенерации кости, цемента и ткани PDL (таблица 2). Уровни экспрессии CP23, ALP и OC были выше, чем у Col XII через 5 недель после посева клеток.Это может быть объяснено индукцией более позднего дифференцировочного ответа репопулирующих клеток PDL после начальной пролиферативной фазы [18].

Человеческие PDLSC в этом исследовании были жизнеспособны и могли рецеллюляризироваться на децеллюляризированном пародонтальном каркасе, что было продемонстрировано анализом жизнеспособности клеток и окрашиванием H&E. Экспрессия OC была более заметной, чем экспрессия CP23 при окрашивании IHC. Экспрессия OC, окружающих цемент в рецеллюляризованных конструкциях, свидетельствует о том, что децеллюляризированные каркасы обладают потенциалом индукции биоминерализации и ремоделирования кости [7].Примечательно, что PDLSC могут проникнуть и заселиться вблизи области цемента из-за пределов ECM.

Вырыв зуба составляет 16% всех травматических повреждений постоянного прикуса и сопровождается тяжелым повреждением ПДС [37]. Клетки PDL повреждаются при неправильном хранении вырванных зубов. После реплантации вырванных зубов может произойти воспалительная резорбция корня и дальнейшая потеря зуба. В этом исследовании децеллюляризированные каркасы PDL срезов зубов сохранили свою структуру, а коллаген остался в ECM.Они также обладают потенциалом рецеллюляризации и индуцируют экспрессию генов, связанных с PDL и регенерацией кости. Применение аутологичных мезенхимальных стволовых клеток к децеллюляризированному пародонтальному каркасу вырванного зуба, что потенциально способствует пролиферации и дифференцировке клеток PDL, может быть новым подходом к регенерации PDL.

Каталожные номера

  1. 1. Гронтос С., Манкани М., Брахим Дж., Роби П.Г., Ши С. Постнатальные стволовые клетки пульпы зуба человека (DPSC) in vitro и in vivo.Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 2000;97(25):13625–30. Эпублик 23.11.2000. пмид:11087820; Центральный PMCID PubMed: PMCPMC17626.
  2. 2. Яо С., Пан Ф., Прпик В., Уайз Г.Э. Дифференцировка стволовых клеток в зубном фолликуле. Журнал стоматологических исследований. 2008;87(8):767–71. Эпб 2008/07/25. пмид: 18650550; Центральный PMCID PubMed: PMCPMC2553250.
  3. 3. Сео Б.М., Миура М., Гронтос С., Бартольд П.М., Батули С., Брахим Дж. и др.Исследование мультипотентных постнатальных стволовых клеток периодонтальной связки человека. Ланцет (Лондон, Англия). 2004;364(9429):149–55. Эпб 2004/07/13. пмид:15246727.
  4. 4. Миура М., Гронтос С., Чжао М., Лу Б., Фишер Л.В., Роби П.Г. и др. SHED: стволовые клетки отслоившихся молочных зубов человека. Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 2003; 100(10):5807–12. Эпубликовано 30 апреля 2003 г. пмид:12716973; Центральный PMCID PubMed: PMCPMC156282.
  5. 5.McCulloch CA, Bordin S. Роль субпопуляций фибробластов в физиологии и патологии пародонта. J Периодонтальная Рез. 1991; 26 (3 часть 1): 144–54. Эпб 1991/05/01. пмид: 1830616.
  6. 6. Исака Дж., Охазама А., Кобаяши М., Нагашима С., Такигучи Т., Кавасаки Х. и др. Участие клеток периодонтальной связки в регенерации альвеолярного отростка. J Пародонтол. 2001;72(3):314–23. Эпублик 01.05.2001. пмид: 11327058.
  7. 7. Dan H, Vaquette C, Fisher AG, Hamlet SM, Xiao Y, Hutmacher DW и др.Влияние клеточного источника на регенерацию пародонта с использованием поликапролактонового каркаса, покрытого фосфатом кальция, с опорой на клеточные листы. Биоматериалы. 2014;35(1):113–22. пмид:24120045
  8. 8. Bratthall G, Söderholm G, Neiderud AM, Kullendorff B, Edwardsson S, Attström R. Направленная регенерация тканей при лечении внутрикостных дефектов человека. Клинические, рентгенологические и микробиологические результаты: пилотное исследование. Журнал клинической пародонтологии. 1998;25(11):908–14.
  9. 9.Хан Дж., Мениканин Д., Гронтос С., Бартольд П.М. Стволовые клетки, тканевая инженерия и регенерация пародонта. Австралийский стоматологический журнал. 2014;59(s1):117–30. пмид:24111843
  10. 10. Гомес-Флорит М., Монжо М., Рамис Дж.М. Кверцитрин для регенерации пародонта: воздействие на фибробласты десен человека и мезенхимальные стволовые клетки. Научный доклад 2015; 5:16593. Эпублик 13.11.2015. пмид: 26558438; Центральный PMCID PubMed: PMCPMC4642307.
  11. 11. Картер С.Д., Коста П.Ф., Вакет С., Ивановски С., Хутмахер Д.В., Мальда Дж.Аддитивное биопроизводство: передовой подход к регенерации тканей пародонта. Энн Биомед Инж. 2017;45(1):12–22. Эпб 2016/07/31. пмид: 27473707; Центральный PMCID PubMed: PMCPMC5215138.
  12. 12. Quint C, Kondo Y, Manson RJ, Lawson JH, Dardik A, Niklason LE. Децеллюляризованный тканеинженерный кровеносный сосуд как артериальный проводник. Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 2011;108(22):9214–9. Эпб 2011/05/17. пмид: 21571635; Центральный PMCID PubMed: PMCPMC3107282.
  13. 13. Сидайн З.Х., Брэди А.Р., Крен С., Тейлор Д.А., Транкильо Р.Т. Децеллюляризованные тканеинженерные створки клапана сердца с потенциалом рецеллюляризации. Тканевая инженерия Часть A. 2013;19(5–6):759–69. Эпб 2012/10/24. пмид: 23088577; Центральный PMCID PubMed: PMCPMC3566676.
  14. 14. Гилберт Т.В., Селларо Т.Л., Бадылак С.Ф. Децеллюляризация тканей и органов. Биоматериалы. 2006;27(19):3675–83. пмид:16519932
  15. 15. Крапо П.М., Гилберт Т.В., Бадылак С.Ф.Обзор процессов децеллюляризации тканей и целых органов. Биоматериалы. 2011;32(12):3233–43. Эпб 2011/02/08. пмид: 21296410; Центральный PMCID PubMed: PMCPMC3084613.
  16. 16. Сонг Дж. С., Такимото К., Чон М., Вадакекалам Дж., Рупарел Н. Б., Диоген А. Децеллюляризованная пульпа зуба человека как каркас для регенеративной эндодонтии. Журнал стоматологических исследований. 2017;96(6):640–6. Эпб 2017/02/15. пмид: 28196330.
  17. 17. Фараг А., Фараг А., Вакет С., Теодоропулос С., Гамлет С.М.Децеллюляризованные клеточные листы периодонтальной связки с потенциалом рецеллюляризации. Журнал стоматологических исследований. 2014;93(12):1313–9. пмид:25270757
  18. 18. Фараг А., Хашими С.М., Вакетт С., Бартольд П.М., Хатмахер Д.В., Ивановски С. Влияние децеллюляризированных тканевых инженерных конструкций на регенерацию пародонта. Дж. Клин Пародонтол. 2018;45(5):586–96. Эпб 2018/03/04. пмид: 29500836.
  19. 19. Ливак К.Дж., Шмитген Т.Д. Анализ данных об относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и 2(-Delta Delta C(T)).Методы. 2001;25(4):402–8. пмид:11846609
  20. 20. Caralt M, Uzarski JS, Iacob S, Obergfell KP, Berg N, Bijonowski BM, et al. Оптимизация и критическая оценка стратегий децеллюляризации для разработки каркасов почечного внеклеточного матрикса в качестве биологических шаблонов для инженерии органов и трансплантации. Американский журнал трансплантологии. 2015;15(1):64–75. пмид:25403742
  21. 21. Чун С.И., О С.Х., Ю Дж.Дж., Квон Т.Г. Методы изготовления и характеристики каркасов для децеллюляризованных органов.Тканевая инженерия и регенеративная медицина. 2015;12(1):1–10.
  22. 22. Бадылак С.Ф., Тейлор Д., Уйгун К. Инженерия ткани всего органа: децеллюляризация и рецеллюляризация трехмерных матричных каркасов. Ежегодный обзор биомедицинской инженерии. 2011;13(1):27–53. пмид:21417722
  23. 23. Казимир М.Т., Ридер Э., Зеебахер Г., Нигиш А., Декан Б., Вольнер Э. и др. Децеллюляризация не устраняет тромбогенность и воспалительную стимуляцию в тканеинженерных клапанах сердца свиньи.Журнал болезней сердечных клапанов. 2006;15(2):278–86. WOS:000236097000026. пмид:16607912
  24. 24. Саймон П., Казимир М.Т., Зеебахер Г., Вайгель Г., Ульрих Р., Зальцер-Мухар У и др. Ранняя недостаточность тканеинженерного клапана сердца свиньи SYNERGRAFT у детей. Eur J Cardiothorac Surg. 2003;23(6):1002–6; обсуждение 6. Epub 2003/06/28. пмид:12829079.
  25. 25. Блох О., Голде П., Домен П. М., Познер С., Конертц В., Эрдбругер В. Иммунный ответ у пациентов, получающих биопротез клапана сердца: отсутствие ответа при децеллюляризированных клапанах.Тканевая инженерия Часть A. 2011;17(19–20):2399–405. Эпб 12/05/2011. пмид: 21557643.
  26. 26. Lu H, Hoshiba T, Kawazoe N, Chen G. Сравнение методов децеллюляризации для подготовки каркасов внеклеточного матрикса, полученных из трехмерной клеточной культуры. J Biomed Mater Res A. 2012;100(9):2507–16. Эпб 2012/05/25. пмид: 22623317.
  27. 27. Накаяма К.Х., Батчелдер К.А., Ли К.С.И., Тарантал А. Децеллюляризованная почка макаки-резус как трехмерный каркас для инженерии почечной ткани.Тканевая инженерия, часть A. 2010: 100216005013075. пмид:20156112
  28. 28. Вудс Т., Гратцер П.Ф. Эффективность трех методов экстракции при разработке костного трансплантата децеллюляризованная кость-передняя крестообразная связка. Биоматериалы. 2005;26(35):7339–49. пмид:16023194
  29. 29. Наир Р., Нганган А.В., Макдевитт Т.С. Эффективность методов экстракции растворителем для ацеллюляризации эмбриоидных тел. J Biomater Sci Polym Ed. 2008;19(6):801–19. Эпб 2008/06/07. пмид: 18534098.
  30. 30. Jank BJ, Xiong L, Moser PT, Guyette JP, Ren X, Cetrulo CL и др. Сконструированная композитная ткань в качестве биоискусственного трансплантата конечности. Биоматериалы. 2015;61:246–56. Эпб 2015/05/26. пмид:26004237; Центральный PMCID PubMed: PMCPMC4568187.
  31. 31. Pang K, Du L, Wu X. Замена передней части роговицы кролика, полученная из бесклеточного матрикса роговицы свиньи, эпителиальных клеток и кератоцитов. Биоматериалы. 2010;31(28):7257–65. Эпб 2010/07/06. пмид: 20598368.
  32. 32.Zhou J, Fritze O, Schleicher M, Wendel HP, Schenke-Layland K, Harasztosi C, et al. Влияние децеллюляризации сердечного клапана на трехмерную ультраструктуру, иммуногенность и тромбогенность. Биоматериалы. 2010;31(9):2549–54. Эпублик 12.01.2010. пмид: 20061016.
  33. 33. Шанер П.Дж., Мартин Н.Д., Туленко Т.Н., Шапиро И.М., Тарола Н.А., Лейхтер Р.Ф. и соавт. Децеллюляризованная вена как потенциальный каркас для инженерии сосудистой ткани. J Vasc Surg. 2004;40(1):146–53. Эпублик 2004/06/26. пмид: 15218475.
  34. 34. Guyette JP, Charest JM, Mills RW, Jank BJ, Moser PT, Gilpin SE и другие. Биоинженерия миокарда человека на нативном внеклеточном матриксе. Цирк рез. 2016;118(1):56–72. Эпб 2015/10/28. пмид: 26503464; Центральный PMCID PubMed: PMCPMC4740234.
  35. 35. Гилпин А., Ян Ю. Стратегии децеллюляризации для регенеративной медицины: от методов обработки к приложениям. Биомед Рез Инт. 2017;2017:9831534. Эпаб 2017/05/26. пмид: 28540307; Центральный PMCID PubMed: PMCPMC5429943.
  36. 36. Каку М., Ямаути М. Механо-регуляция биосинтеза коллагена в периодонтальной связке. J Протезирование Res. 2014;58(4):193–207. Эпублик 15.10.2014. пмид: 25311991; Центральный PMCID PubMed: PMCPMC4253671.
  37. 37. Андреасен Дж.О. Этиология и патогенез травматических повреждений зубов. Клиническое исследование 1298 случаев. Scand J Dent Res. 1970;78(4):329–42. Эпб 1970/01/01. пмид:4394635.

Могут ли аллигаторы раскрыть секрет регенерации человеческих зубов?

ВОТ УВЛЕКАТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ , которым вы захотите поделиться со своим ребенком! У аллигатора более 80 зубов, каждый из которых может быть заменен до 50 раз в течение жизни! Потенциально, это тысячи зубов! Более того, аллигаторов могут помочь ученым узнать, как стимулировать обновление зубов у людей .

Зубы аллигатора похожи на человеческие

Как и у людей, у аллигаторов хорошо организованные зубы с различными функциями, закрепленные в костных углублениях. Исследования показывают, что у каждого зуба аллигатора есть три части (или фазы) — рабочий зуб, зуб-заменитель (готовый заменить рабочий зуб в случае его потери) и зубная пластинка (полоска ткани, которая, по-видимому, является центром). для развития новых зубов). Люди похожи, но с одной большой разницей. У нас есть взрослые зубы (это наши «рабочие зубы») и у нас есть зубная пластинка.Чего у нас нет, так это замещающих зубов. В то время как большинство позвоночных могут менять зубы до самой смерти, человеческие зубы меняют себя только один раз. Вопрос на миллион долларов: почему сменные зубы перестают расти после нашего первого взрослого набора?

Секрет может быть в зубной пластинке

Исследователи считают, что зубная пластинка является источником регенерации зубов.