Содержание

Статья 18. Виды деятельности, подлежащие лицензированию / КонсультантПлюс

КонсультантПлюс: примечание.

До 01.07.2021 выписка из реестра о выданной лицу лицензии предоставляется путем направления по адресу электронной почты, указанному лицом в заявлении, направленном через официальный сайт Росалкогольрегулирования (ФЗ от 22.12.2020 N 436-ФЗ).

Статья 18. Виды деятельности, подлежащие лицензированию

1. Лицензированию подлежат виды деятельности по производству и обороту этилового спирта, алкогольной и спиртосодержащей продукции, за исключением:

производства и оборота фармацевтической субстанции спирта этилового (этанола), спиртосодержащих лекарственных препаратов и (или) спиртосодержащих медицинских изделий, а также пива и пивных напитков, сидра, пуаре, медовухи;

(в ред. Федерального закона от 29.07.2017 N 278-ФЗ)

розничной продажи спиртосодержащей продукции;

закупки этилового спирта, алкогольной и спиртосодержащей продукции в целях использования их в качестве сырья или вспомогательного материала при производстве алкогольной, спиртосодержащей и иной продукции либо в технических или иных не связанных с производством указанной продукции целях;

перевозок этилового спирта и нефасованной спиртосодержащей продукции с содержанием этилового спирта более 25 процентов объема готовой продукции, осуществляемых в объеме, не превышающем 200 декалитров в год, организациями, закупившими указанную продукцию в целях использования ее в качестве сырья или вспомогательного материала при производстве неспиртосодержащей продукции либо в технических целях или иных целях, не связанных с производством и (или) оборотом (за исключением закупки) этилового спирта, алкогольной и спиртосодержащей продукции, на транспортных средствах, находящихся в собственности, оперативном управлении, хозяйственном ведении таких организаций;

(абзац введен Федеральным законом от 23.07.2013 N 232-ФЗ; в ред. Федерального закона от 22.12.2020 N 436-ФЗ)

производства и оборота виноградного сусла, произведенного сельскохозяйственными товаропроизводителями;

(абзац введен Федеральным законом от 31.12.2014 N 490-ФЗ)

розничной продажи алкогольной продукции физическим лицам от имени и по поручению организации, имеющей лицензию на розничную продажу алкогольной продукции, в случае, если указанная продукция размещена на бортах воздушных судов в качестве припасов в соответствии с правом ЕАЭС и законодательством Российской Федерации о таможенном деле, и розничной продажи алкогольной продукции физическим лицам для потребления (распития) на борту воздушного судна при оказании услуг общественного питания от имени и по поручению организации, имеющей лицензию на розничную продажу алкогольной продукции при оказании услуг общественного питания;

(абзац введен Федеральным законом от 29.07.2017 N 278-ФЗ)

международных автомобильных перевозок этилового спирта (в том числе денатурата) и нефасованной спиртосодержащей продукции с содержанием этилового спирта более 25 процентов объема готовой продукции, осуществляемых иностранными перевозчиками — юридическими лицами (за исключением иностранных перевозчиков государств — членов ЕАЭС), если пункт отправления находится на территории Российской Федерации, а пункт назначения — за пределами таможенной территории ЕАЭС;

(абзац введен Федеральным законом от 08.06.2020 N 166-ФЗ)

производства спиртосодержащей продукции в виде полиграфических красок, лаков, красителей для мебельной промышленности при наличии заключения о подтверждении производства такой промышленной продукции на территории Российской Федерации, выданного в соответствии с правилами, установленными Правительством Российской Федерации;

(абзац введен Федеральным законом от 08.06.2020 N 166-ФЗ)

хранения этилового спирта, алкогольной и спиртосодержащей продукции в соответствии с пунктом 2 статьи 25 настоящего Федерального закона;

(абзац введен Федеральным законом от 22.12.2020 N 436-ФЗ)

розничной продажи винодельческой продукции (за исключением коньяка, бренди и виноградной водки) на специализированных ярмарках винодельческой продукции при наличии лицензии на осуществление одного из видов деятельности, указанных в абзацах третьем, шестом, десятом и двенадцатом пункта 2 настоящей статьи.

(абзац введен Федеральным законом от 30.12.2021 N 487-ФЗ)

(п. 1 в ред. Федерального закона от 18.07.2011 N 218-ФЗ)

1.1. Положение абзаца одиннадцатого пункта 1 настоящей статьи применяется в отношении винодельческой продукции, произведенной в Российской Федерации из выращенного на территории Российской Федерации винограда.

Положение абзаца одиннадцатого пункта 1 настоящей статьи применяется в отношении винодельческой продукции, произведенной в государствах — членах ЕАЭС из выращенного на территориях этих государств винограда, при условии подтверждения места произрастания такого винограда в порядке, установленном правом ЕАЭС.

(п. 1.1 введен Федеральным законом от 30.12.2021 N 487-ФЗ)

2. Лицензии выдаются на осуществление следующих видов деятельности:

производство, хранение и поставки произведенного этилового спирта;

(в ред. Федеральных законов от 28.11.2018 N 448-ФЗ, от 22.12.2020 N 436-ФЗ)

производство, хранение и поставки произведенной алкогольной и спиртосодержащей пищевой продукции;

абзац утратил силу. — Федеральный закон от 21.07.2005 N 102-ФЗ;

хранение этилового спирта, алкогольной и спиртосодержащей пищевой продукции;

закупка, хранение и поставки алкогольной и спиртосодержащей продукции;

(в ред. Федерального закона от 21.07.2005 N 102-ФЗ)

абзацы седьмой — восьмой утратили силу. — Федеральный закон от 21.07.2005 N 102-ФЗ;

производство, хранение и поставки спиртосодержащей непищевой продукции;

(в ред. Федерального закона от 21.07.2005 N 102-ФЗ)

розничная продажа алкогольной продукции;

перевозки этилового спирта и нефасованной спиртосодержащей продукции с содержанием этилового спирта более 25 процентов объема готовой продукции;

(абзац введен Федеральным законом от 18.07.2011 N 218-ФЗ; в ред. Федерального закона от 22.12.2020 N 436-ФЗ)

производство, хранение, поставки и розничная продажа произведенной сельскохозяйственными производителями винодельческой продукции;

(абзац введен Федеральным законом от 31.12.2014 N 490-ФЗ)

производство этилового спирта для производства фармацевтической субстанции спирта этилового (этанола).

(абзац введен Федеральным законом от 27.12.2019 N 481-ФЗ)

3. Лицензированию подлежат производство и оборот произведенных этилового спирта, алкогольной и спиртосодержащей продукции по каждому поставляемому или поступающему в розничную продажу виду произведенной продукции, указанному в статье 2 настоящего Федерального закона, а также по каждому виду винодельческой продукции, российской винодельческой продукции защищенных наименований в соответствии с Федеральным законом от 27 декабря 2019 года N 468-ФЗ «О виноградарстве и виноделии в Российской Федерации».

(в ред. Федеральных законов от 31.12.2014 N 490-ФЗ, от 02.07.2021 N 345-ФЗ)

4. Лицензии на осуществление вида деятельности, указанного в абзаце втором пункта 2 настоящей статьи, выдаются отдельно на этиловый спирт и биоэтанол.

(в ред. Федерального закона от 22.12.2020 N 436-ФЗ)

Лицензии на осуществление видов деятельности, указанных в абзацах пятом и шестом пункта 2 настоящей статьи, выдаются отдельно на алкогольную продукцию, спиртосодержащую пищевую продукцию и спиртосодержащую непищевую продукцию.

Лицензии на осуществление вида деятельности, указанного в абзаце одиннадцатом пункта 2 настоящей статьи, выдаются отдельно на этиловый спирт, нефасованную спиртосодержащую пищевую продукцию с содержанием этилового спирта более 25 процентов объема готовой продукции, нефасованную спиртосодержащую непищевую продукцию с содержанием этилового спирта более 25 процентов объема готовой продукции.

(в ред. Федерального закона от 22.12.2020 N 436-ФЗ)

Лицензия на осуществление вида деятельности, указанного в абзаце двенадцатом пункта 2 настоящей статьи, по заявлению сельскохозяйственного товаропроизводителя выдается отдельно на вино, вино с защищенным географическим указанием, вино с защищенным наименованием места происхождения или игристое вино, игристое вино с защищенным географическим указанием, игристое вино с защищенным наименованием места происхождения либо одновременно на указанные виды винодельческой продукции.

(в ред. Федеральных законов от 22.12.2020 N 436-ФЗ, от 02.07.2021 N 345-ФЗ)

КонсультантПлюс: примечание.

О праве организаций, имеющих на 02.07.2021 действующие лицензии, осуществлять деятельность в отношении фруктового вина или винных напитков (которые произведены не из винограда), см. ФЗ от 02.07.2021 N 345-ФЗ

Лицензии на осуществление вида деятельности, указанного в абзаце десятом пункта 2 настоящей статьи, выдаются отдельно на розничную продажу алкогольной продукции и розничную продажу алкогольной продукции при оказании услуг общественного питания.

Лицензия на розничную продажу алкогольной продукции предусматривает право организации на осуществление закупки (за исключением импорта) алкогольной продукции по договору поставки, а также хранение закупленной алкогольной продукции и ее реализацию по договору розничной купли-продажи.

Лицензия на розничную продажу алкогольной продукции при оказании услуг общественного питания предусматривает право организации на осуществление закупки (за исключением импорта) алкогольной продукции по договору поставки, хранение (в том числе во вскрытой потребительской таре (упаковке), использование в соответствии с подпунктом 15 статьи 2 настоящего Федерального закона для изготовления алкогольных напитков, кулинарных блюд, спиртосодержащей пищевой продукции и иной пищевой продукции, отпуск алкогольной продукции потребителю во вскрытой потребительской таре или в розлив, осуществляемые при оказании услуг общественного питания.

Лицензия на производство, хранение, поставки и розничную продажу винодельческой продукции, произведенной сельскохозяйственными товаропроизводителями, предусматривает право как на розничную продажу указанной продукции, так и на розничную продажу указанной продукции при оказании услуг общественного питания.

В случае указания в лицензии на розничную продажу алкогольной продукции при оказании услуг общественного питания в качестве места осуществления деятельности конкретного водного судна или вагона-ресторана (вагона-кафе, вагона-буфета, вагона-бара) организация вправе осуществлять в нем розничную продажу алкогольной продукции при оказании услуг общественного питания на всем пути следования водного судна или вагона-ресторана (вагона-кафе, вагона-буфета, вагона-бара), входящего в состав поезда дальнего следования.

Лицензия на производство этилового спирта для производства фармацевтической субстанции спирта этилового (этанола) предусматривает право организации на производство этилового спирта исключительно в целях использования этилового спирта для производства этой организацией фармацевтической субстанции спирта этилового (этанола).

(абзац введен Федеральным законом от 27.12.2019 N 481-ФЗ)

(п. 4 в ред. Федерального закона от 28.11.2018 N 448-ФЗ)

5. Лицензии на производство и оборот произведенных этилового спирта, алкогольной и спиртосодержащей продукции выдаются только заявителям, которые имеют оборудование, отвечающее требованиям статьи 8 настоящего Федерального закона.

(в ред. Федеральных законов от 21.07.2005 N 102-ФЗ, от 31.12.2014 N 490-ФЗ)

6 — 7. Утратили силу. — Федеральный закон от 21.07.2005 N 102-ФЗ.

8. Лицензии на виды деятельности, указанные в пункте 2 настоящей статьи, выдаются в порядке, установленном настоящим Федеральным законом.

(в ред. Федерального закона от 22.12.2020 N 436-ФЗ)

Абзац утратил силу с 1 января 2021 года. — Федеральный закон от 22.12.2020 N 436-ФЗ.

(п. 8 в ред. Федерального закона от 18.07.2011 N 218-ФЗ)

9. Лицензии на виды деятельности, указанные в пункте 2 настоящей статьи, за исключением розничной продажи алкогольной продукции, выдаются федеральным органом по контролю и надзору.

(в ред. Федеральных законов от 18.07.2011 N 218-ФЗ, от 22.12.2020 N 436-ФЗ)

10. Лицензии на розничную продажу алкогольной продукции выдаются органами исполнительной власти субъектов Российской Федерации. Полномочия на лицензирование розничной продажи алкогольной продукции могут быть переданы субъектом Российской Федерации органам местного самоуправления в соответствии со статьей 7 настоящего Федерального закона. Лицензия на розничную продажу алкогольной продукции, выданная одним субъектом Российской Федерации, может действовать на территории другого субъекта Российской Федерации при условии наличия между ними соответствующего соглашения.

(в ред. Федерального закона от 18.07.2011 N 218-ФЗ)

Абзац утратил силу. — Федеральный закон от 05.04.2010 N 41-ФЗ.

(п. 10 в ред. Федерального закона от 21.07.2005 N 102-ФЗ)

Хлоргексидин

ХЛОРГЕКСИДИН

Антисептическое средство, обладающее выраженным бактерицидным действием в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий (не влияет на кислотоустойчивые формы последних): Treponema pallidum, Chlamidia spp., Ureaplasma spp., Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, Bacteroides fragilis, простейших (Trichomonas vaginalis), микробных спор, вирусов, грибов; слабо влияет на некоторые виды протея и псевдомонад. Хлоргексидина биглюконат активен также в отношении трепонем, гонококков, трихомонад. Сохраняет активность (несколько сниженную) в присутствии крови, гноя. Очищает и обеззараживает кожу, не вызывая ее повреждения.

Показания к применению

В стоматологии используется для полоскания полости рта в послеоперационном периоде после лоскутных операций на пародонте, для промываний зубодесневых карманов, свищей, полостей абсцессов. 

После удаления зубов, после установки пломб и любых стоматологических  процедур!

Применяется для антисептической обработки ран, потертостей и трещин, ожогов, при бактериальных и грибковых заболеваниях кожи и слизистых оболочек, в т.ч. в урологии, хирургии, акушерстве-гинекологии.

Дезинфекция гнойных ран, бактериальные и грибковые заболевания кожи и слизистых оболочек. В стоматологии (гингивит, стоматит, афты, пародонтоз, альвеолит).

Лекарственное средство применяется для профилактики венерических заболеваний (сифилиса, гонореи, трихомониаза, хламидиоза и др.).

Профилактика инфекций, передаваемых половым путем (хламидиоз, уреаплазмоз, трихомониаз, гонорея, сифилис, генитальный герпес. Применение не позднее 2 ч после полового акта).

Описание: прозрачный или с легкой опалесценцией, бесцветный раствор, без запаха.

Состав для 100 мл:

Хлоргексидина биглюконата (20 % раствор) — 0,25 мл. воды очищенной – до 100 мл.

Способ применения 

Наружно или местно,  в виде орошений, полосканий и аппликаций.

Пораженные участки кожи или слизистых оболочек обрабатывают ватным тампоном или бинтом, смоченных 5-10 мл 0,05% раствора с экспозицией 1-3 минуты 2-3 раза в день или в виде орошений.

Для ухода за пациентами в ЛОР или стоматологическом отделении осуществляют полоскание после еды 2-3 раза в день

Для профилактики заболеваний, передающихся половым путем, раствор с помощью насадки ввести в мочеиспускательный канал мужчинам (2 — 3 мл), женщинам (1 — 2 мл) и во влагалище (5 — 10 мл) на 2 — 3 мин. Обработать кожу внутренних поверхностей бедер, лобка, половых органов. После процедуры не мочиться в течение 2 ч.

Побочное действие

При повышенной чувствительности к компонентам препарата возможны аллергические реакции. При появлении любых побочных реакций, необходимо прекратить применение препарата.

Противопоказания к применению

Повышенная чувствительность к хлоргексидину, дерматиты.

Предостережения

Препарат использовать только наружно или местно! Не допускается проглатывание препарата!

Следует избегать попадания препарата на слизистую оболочку глаз.

При случайном попадании препарата на слизистую оболочку глаз, их следует немедленно промыть большим количеством воды.

Взаимодействие с другими лекарственными средствами

Не совместим с детергентами, содержащими анионную группу (сапонины, натрия лаурилсульфат, натрия карбоксиметилцеллюлоза). Не рекомендуется одновременное применение с йодом.

Присутствие мыла может инактивировать хлоргексидина биглюконат, поэтому перед использованием лекарственного средства остатки мыла необходимо тщательно смыть. Этанол усиливает эффективность лекарственного средства.

Этанол усиливает эффективность лекарственного средства.

Условия хранения

Хранить при температуре не выше 25 °C.

Хранить в недоступном для детей месте.

Срок годности

2 года. Не использовать по истечении срока годности.

Производство «Depofarm». Молдова.

Недорогой антисептик, доступный пенсионерам

Ежедневный уход за новорожденным » КГБУЗ «Таймырская МРБ»

Основные процедуры

Что собой представляет ежедневный уход за новорожденным, как умывать малыша и ухаживать за пупочной ранкой, как менять подгузники, ухаживать за ногтями, кормить ребенка и гулять с ним — об этих основных процедурах ухода за новорожденным мы расскажем в нашей статье.
  
Когда приходит время возвращаться домой с новорожденным из роддома, каждая мама начинает переживать о том, как она будет ухаживать за ребенком без помощи и компетентных советов медицинского персонала.

Все без исключения мамы волнуются, смогут ли они обеспечить своему ребенку необходимый для его здорового роста уход: правильно искупать малыша, срезать ему ногти, обработать пупочную ранку.

Поэтому, не успеют мамы переступить порог родного дома, как у них возникает множество вопросов по поводу ухода за ребенком: стоит ли мыть малыша после каждого мочеиспускания, чем лучше обрабатывать пупок: зеленкой или настойкой календулы?

Сегодня мы постараемся найти ответы на главные вопросы о гигиене ребенка и рассказать об основных процедурах ежедневного ухода за малышом.
Утренний туалет новорожденного

Как и каждый человек, малыш должен утром умываться, безусловно, в этом ему должна помочь мама.

После того, как новорожденный проснется, разденьте его догола, пусть немного полежит голенький — это полезно для кожи ребенка. Затем тщательно осмотрите малыша, проверьте, нет ли покраснений на коже, потницы. Если есть, то подготовьте детский крем, чтобы смазать проблемные места после умывания малыша.

Малыша умывают с помощью ватных дисков, смоченных в теплой кипяченой водичке. Умывание новорожденного проводят сверху вниз. 
Протирайте малышу глазки от внешнего края к внутреннему. Для гигиены каждого глаза рекомендуется брать новый ватный диск.
Аккуратно протирайте влажным ватным диском личико ребенка, ушки – снаружи, кожу за ушками, шейку.
Прислушайтесь к дыханию малыша, оно должно быть свободным. Если дыхание затруднено, прочистите нос малышу. Для этого можно использовать специальный солевой раствор для детей до года и аспиратор (устройство, которое помогает отсасывать слизь).
Кроме того, очистить носик от корочек можно с помощью двух небольших ватных жгутиков, смоченных в детском масле. Жгутики нужно аккуратно поочередно вставить в каждую ноздрю детского носа и прокрутить несколько раз. Если носик малыша дышит хорошо, тогда его не нужно чистить.
Затем необходимо протереть влажным ватным диском все складочки кожи малыша, заменить ребенку грязный подгузник на чистый, подмыв малыша или воспользовавшись детскими влажными салфетками для очищения кожи.

Уход за пупочной ранкой

В период новорожденности особое место на теле ребенка – это пупочная ранка, оно требует тщательного ухода.
Как правило, пупочную ранку обрабатывают один раз в день, можно это делать после купания, когда от воды все корочки размокнут и слизь вымоется.

Как обрабатывать пупок новорожденного? Способов обработки пупочной ранки существует несколько, каждый из них достаточно эффективен:

  • уход за пупком кипяченой водичкой – для этого один раз в день смочите ватный диск кипяченой водой и хорошенько протрите пупочную ранку так, чтобы она стала чистой, затем в течение нескольких минут просушите пупок;
  • обработка пупка перекисью водорода и антисептиком (хлоргексидин, банеоцин, левомеколь, йод, бриллиантовой зеленью, хлорофилипт на спиртовой основе ) – для обработки пупка возьмите две ватные палочки, одну окуните в перекись, другую – в антисептик, сначала обработайте пупок перекисью, которой мы отмываем все корочки с пупка, а затем антисептиком.
Рекомендации по поводу выбора того или иного метода обработки пупка обычно дают медсестры в роддоме, а также патронажная сестра, которая будет приходить к вашему малышу в течение первого месяца жизни.

Важно! Если вы заметили, что кожа вокруг пупочной ранки воспалилась, обязательно обратитесь к врачу.
Если вы видите, что пупочная ранка не заживает в течение месяца, лучше показать ребенка врачу. Обычно до 14 дней жизни пупочный остаток отпадает и ранка заживает.

Подмывание новорожденного

Подмывать малыша под проточной водой нужно после каждой дефекации.

Удобно подмывать новорожденного так:
Положите малыша животом на вашу левую ладонь лицом к себе или спиной на свое предплечье головой к вам.
Подставьте нижнюю часть туловища ребенка под проточную воду.
Намыльте ягодицы и половые органы малыша детским мылом (лучше выбирать жидкое мыло для детей, им удобнее пользоваться).
Потом тщательно смойте мыло водой, промокните кожу ребенка полотенцем или пеленкой.
Если малыш только помочился в подгузник, то можно не подмывать его, а при смене подгузника воспользоваться влажными салфетками. Выбирайте специальные детские салфетки без ароматизаторов и спирта.
Смена подгузников

Чаще всего для ухода за детьми мамы используют одноразовые подгузники. Есть несколько простых правил, которые важно соблюдать в этом случае:

При их использовании помните, что ребенок не должен находиться в одном одноразовом подгузнике более 4-х часов.
Надевать подгузник на новорожденного нужно так, чтобы пупочный остаток не был прикрыт. Это нужно для наиболее быстрого заживления пупочной ранки.

Желательно, чтобы несколько часов в день малыш просто так лежал на пеленке без подгузника, чтобы кожа могла подышать.

Также важно следить за тем, чтобы на коже под подгузником не образовались опрелости. Для предотвращения опрелостей необходимо одевать малыша по погоде, то есть не перегревать его, а также можно использовать специальный крем под подгузник.

Если опрелости уже образовались, нужно обратиться к врачу, он порекомендует средство для их заживления, скорее всего, это будет крем, содержащий декспантенол – эффективное заживляющее лекарство.

Безусловно, лучше предотвратить опрелости, так как они могут сильно болеть и беспокоить малыша.
Купание новорожденного

Всех мам интересует вопрос: когда же можно начинать купать ребенка после выписки из роддома?

«Купать ребенка можно сразу после выписки, но если вам сделали прививку БЦЖ, но в течение суток-двоих после прививки лучше не купать ребенка, чтобы не намочить место инъекции».

После того как заживет пупочная ранка, вы можете уже купать ребенка в обычной ванне в водопроводной воде, постепенно увеличивая время купания от 5 минут до 30-40.

Ежедневно во время купания ребенка необходимо мыть ему половые органы и ягодицы, 1-2 раза в неделю нужно помыть с мылом всего малыша, а также вымыть ребенку голову специальным детским шампунем.

Важно! Купайте ребенка всегда с открытой дверью в ванной, благодаря этому ребенку будет не так холодно после того, как вы его вытащите из воды, так как разница температур будет не слишком большая.

Каждый раз опускать малыша в воду нужно медленно, начиная с ножек. В воде необходимо поддерживать все тело ребенка. Если вода во время купания попадет малышу в уши или глаза – это не страшно, это вполне естественно!

Уже с первых дней жизни вы можете начать легкое закаливание ребенка. Для этого, прежде чем начать купание малыша, подготовьте и поставьте в ванной сосуд с водой, температура которой будет на 0,5-1 градус ниже температуры воды в ванне. В конце купания полейте на ребенка из этого сосуда.

После купания малыша нужно промокнуть пеленкой или полотенцем, но не вытирать, так как эта процедура может повредить нежную детскую кожу.

Также нужно подготовить два небольших ватных жгутика и нежно вкрутить их в ушные раковины ребенка, чтобы вата впитала в себя ту воду, которая попала в уши во время купания. После того, как кожа ребенка высохнет, желательно обработать складки детским маслом.
Уход за ногтями новорожденного

Ухаживать за ногтями малыша необходимо 1-2 раза в неделю, так как ноготки у детей растут очень быстро. Для срезания ногтей нужно приобрести специальные ножницы с закругленными концами. На ногах ногти нужно срезать ровно, а на руках – закругляя края.
Прогулки с ребенком

В летнее время гулять с малышом можно на следующий день после выписки из роддома. Желательно оберегать ребенка от прямых солнечных лучей. Выходить на прогулку летом лучше или утром (до 10 часов утра), или вечером (после 18 часов), в это время не так жарко.

Зимой прогулки рекомендуют начинать через 2-3 дня после выписки из роддома. Если температура на улице ниже 10 градусов, с малышом лучше на прогулку не выходить.

Первая прогулка должна быть совсем короткой – 10-15 минут. Затем каждый день стоит гулять на 10 минут дольше.

Готовясь к прогулке с малышом, мамы обычно сомневаются, правильно ли они одели малыша. Чтобы не прогадать с одеждой, всегда нужно соблюдать простое правило – одежды на малыше должно быть столько, сколько и на вас, плюс еще один слой. Так малышу будет комфортно.

Конечно, во время прогулки стоит проверять состояние ребенка. Летом важно не перегреть малыша: если ребенок стал красным, значит, стоит что-то с него снять, ему жарко.

В зимнюю пору велика опасность перемерзания. Если малыш замерз, у него будут холодные руки, ноги и нос, в таком случае не помешает дополнительное одеяло.

А.Х. Абзалова,
врач-неонатолог

Аллергический дерматит у собак: Симптомы и лечение заболевания

Что такое аллергия? Это повышенная чувствительность иммунитета на определенное вещество, которое мы закономерно называем аллергеном. По какой-то причине организм считает, что это вещество опасно и начинает активно вырабатывать антитела для борьбы с ним. Аллергия может развиться на все что угодно и зачастую на самые безобидные вещи – на пыль, на определенные продукты, на пыльцу и т.д. Реакции иммунитета очень сложны. Понять, почему организм так реагирует, мы не может. Зато мы точно можем контролировать аллергию у питомца. Только не надо делать этого самостоятельно! Все не так просто, как кажется на первый взгляд. Самолечением можно только навредить собаке! Поиском аллергена стоит заниматься вместе с ветеринарным врачом. Пусть на решение проблемы иногда уходит несколько месяцев, но аллергию можно победить и обеспечить питомцу жизнь без дискомфорта.

Виды аллергического дерматита у собак

Наиболее частое проявление аллергии у человека – ринит (насморк) и слезотечение, а у братьев наших меньших в первую очередь страдает кожа. Воспаление, покраснение, зуд – верные спутники аллергии у собак.

Чаще всего причины кожных проявлений аллергии это:

Разберем по порядку.

Блошиный дерматит

Наиболее частая причина дерматита – аллергия на слюну блох. Владельцы до последнего отрицают возможность того, что у собаки блохи, заметить незваных гостей очень сложно. Ведь на собаку блохи приходят только поесть, все остальное время они живут в окружающей среде – щелях в полу, подстилке, коврах. Одного укуса достаточно, чтобы развилась аллергическая реакция. Блошиный дерматит проявляется в виде сильного воспаления, собака расчесывает места укусов «до крови» и это совсем не идет на пользу коже. На расчесанные места с легкостью может присоединиться вторичная инфекция и лечение затянется. Своевременная обработка от блох помогает избежать все этих неприятных сюрпризов. Заметив подозрительный зуд у любимца – не затягивайте с походом к ветеринарному врачу.

Профилактировать и лечить заражение паразитами можно с помощью капель Стронгхолд или таблеток Симпарика. Любой из этих вариантов поможет в борьбе с блохами и обеспечит собаке защиту.

Атопический дерматит

Из всех дерматитов атопия стоит на втором месте по распространенности. Атопический дерматит передается на генетическом уровне, это хроническое заболевание, и вылечить его полностью невозможно. Но комфортную жизнь обеспечить животному с таким диагнозом можно.

У собак с атопией аллергия может проявиться на что угодно, и далеко не всегда удается выявить аллерген. Это может быть микроскопическая пыль, пыльца определенного растения (поэтому атопический дерматит может быть сезонным), шерсть другого животного, перья от подушки и т.д. Что обидно, при выборе щенка невозможно угадать, есть ли у него атопия. Ведь его родители могли никогда в жизни не столкнуться с тем, что вызовет атопический дерматит именно у них. Но при выявлении такой генетической предрасположенности, грамотные заводчики стараются вывести этих собак из разведения.

Симптомы атопического дерматит проявляются достаточно ярко и включают в себя:

  • Очаги алопеций (облысения) как единичные, так и множественные. Преимущественно в паху, на животе, конечностях и голове. Позже – на сгибах конечностей;
  • Сухость кожи в местах поражения;
  • Воспаление;
  • Сильнейший зуд;
  • Появления гнойных пустул (прыщиков), которые постепенно исчезают, но почти сразу появляются новые;
  • Неприятный запах.

Симптомы не обязательно проявляются сразу все. Но заметив облысение, красноту кожи и зуд лучше как можно быстрее обратиться к врачу.

Воспаленная и расчёсанная самой собакой кожа теряет свою естественную защиту и становится буквально воротами для присоединения бактерий и дрожжевидных грибков. Поэтому, если не начать лечение вовремя, придется лечить еще и вторичную инфекцию.

Лечение атопического дерматита всегда комплексное, оно направлено на контроль развития симптомов, снижение дискомфорта у собаки и поддержание ремиссии (периода без клинических признаков). Решение о выборе лечения всегда принимает ветеринарный врач, но никак не хозяин. Диагноз ставится путем исключения всех остальных причин, которые могли бы вызвать дерматит.

Для контроля атопии ветеринарные врачи рекомендуют:

  • Регулярные обработки от паразитов;
  • По показаниям – мытье собаки с противогрибковым или другим специальным шампунем;
  • Регулярная влажная уборка;
  • Увлажнитель воздуха;
  • Убрать все ковры и мягкие игрушки, которое могут собирать пыль.

Чаще всего для того, чтобы облегчить симптомы и поддержать длительную ремиссию ветеринарные дерматологи назначают Апоквел. Это инновационный препарат в мире ветеринарной фармакологии, который не имеет аналогов. Он значительно улучшает качество жизни собакам с атопическим дерматитом. Апоквел может быть назначен длительным курсом, при этом хорошо переносится организмом четвероногого пациента. Он на клеточном уровне решает проблему зуда и начинает действовать уже в среднем через 4 часа после дачи таблетки.

Но у препарата есть ограничения по применению, поэтому Апоквел не стоит назначить самостоятельно! Его назначать должен ветеринарный врач, который «ведет» вашу собаку, отмечая все изменения клинической картины в динамике. Кроме того, существуют собаки с индивидуальной непереносимостью даже этого препарата. Поэтому прием Апоквела возможен только под контролем врача!

Пищевая аллергия

Самая частая ошибка владельцев, которые подозревают у собаки пищевую аллергию — начинать действовать самостоятельно и перебирать корма. Этим можно не только навредить собаке из-за постоянных смен рациона, но и усложнить задачу ветеринарному врачу в поиске истинной причины аллергии. Пищевые пробы могут занимать до нескольких месяцев. Симптомы любых кожных аллергий в целом схожи – покраснения и залысины, шелушение кожи и, конечно же, зуд.

Лечение и поиск подходящего питания, как было сказано выше, может занять несколько месяцев. Нормализация состояния животного включает в себя:

  • Гипоаллергенные корма под контролем ветеринарного врача;
  • Исключающая диета;
  • Никаких лишних кусочков! Для дрессировки используйте тот же собачий корм, который собака ест обычно. Обязательно обучите собаку не подбирать с земли! Объясните всем членам семьи, что ни в коем случае нельзя давать собаке ничего лишнего. Даже один разочек! Даже если « Ну он же так смотрит!»
  • Препараты, снижающие зуд на время исключающей диеты. Например, Апоквел.

Почему-то большинство владельцев с большой уверенностью заверяют врачей, что главный аллерген – это курица. И старательно избегаю использовать в рационе ни в чем не повинную птицу. А между тем, по современным данным различных исследований, курица стоит на 3-ем месте, и аллергия на нее возникает примерно лишь у 15% животных с пищевой аллергией. Первое место занимают говядина и пшеница (около 65%), а второе – продукты молочного происхождения (20%). Наименее аллергенные продукты – рыба и рис (всего порядка 2%). А еще аллергия может быть сразу на несколько компонентов. И проявляться не только на коже, но и вызывать симптомы со стороны желудочно-кишечного тракта.

Контактная аллергия

Или аллергическая реакция на различные химические вещества. Проследить связь возникновения внезапного покраснения, зуда и, например, применения капель на холку достаточно просто. На месте нанесения препарата возникают залысины, воспаление и это место очень сильно беспокоит животное. Реакция появляется в течение часа-двух. Аллергеном могут быть различные мази, шампуни, ошейники и капли от паразитов и все, с чем так или иначе может контактировать собака.

Конечно, при возникновении контактной аллергии лучшим решением будет как можно быстрее доехать до клиники. Постарайтесь тщательно смыть аллерген с кожи и скорее за врачебной помощью.

Отек Квинке

Это самая острая аллергическая реакция из всех возможных, которая требует незамедлительного вмешательства. Аллергеном могут быть укусы насекомых, змей, введенное лекарство или какой-либо контакт с большим количеством аллергена. Например, когда собака получила неограниченный доступ к клубнике, на которую у нее аллергия.

Отек Квинке развивается стремительно, буквально на глазах: отек морды, места, которое приняло на себя «удар» аллергена (место укуса или укола), отек гортани, а иногда вообще всей поверхности кожи животного.

Это состояние требует немедленного вмешательства врача! Если приехать невозможно, созвонитесь с любой ветеринарной клиникой и следуйте их указаниям. Даже если вы снимите острое состояние, посещение ветеринарного врача все равно обязательно.

Да, покупая собаку, мы берем огромную ответственность и нужно быть готовым к любым неприятностям, которые могут возникнуть. Существуют породы собак, склонные к аллергиям больше остальных (шарпей, лабрадор, французский, английский и американский бульдоги и многие другие). Поэтому, выбирая породу, обратите внимание на эту немаловажную деталь и несколько раз спросите себя: «А готов ли я к проблемам, с которыми мы можем столкнуться вместе с этой собакой?».

Желаем здоровья вам и вашим животным! Осознанное желание быть вместе с четвероногим другом – залог счастливой жизни и для вас, и для питомца.

Осторожно, солнце!

Устав от долгой и снежной зимы мы радуемся теплым дням и яркому солнцу. Но наша радость может быть омрачена, если чрезмерное пребывание на солнце приведет к солнечным ожогам. К сожалению, статистика обращений в медучреждения по поводу солнечных ожогов резко возросла: только за 15 мая 2013 г. в больницу скорой медицинской помощи г.Минска обратилось 5 пациентов с солнечными ожогами.

Солнечный ожог представляет собой воспаление кожи, вызванное чрезмерным воздействием ультрафиолетового (УФ) излучения. УФ-лучи – это невидимые световые волны, источником которых является как солнце, так и лампы солярия. Наиболее интенсивное ультрафиолетовое излучение отмечается в середине дня в период с 10 до 16 часов, особенно в конце весны, летом и в начале осени. Важно знать, что солнечные ожоги можно получить даже в облачную погоду, т.к. облака не задерживают ультрафиолетовые лучи). Кроме того, УФ-излучение имеет свойство отражаться от таких поверхностей как снег, вода или песок. При нахождении рядом с такими поверхностями повышается риск «отраженного» облучения. 

Солнечные ожоги вредны как для кожи, так и для глаз. Они вызывают повреждение ДНК в клетках кожи, тем самым увеличивая риск развития рака кожи и меланомы. Так самый высокий уровень заболеваемости меланомой наблюдается в странах с большим уровнем солнечного облучения, таких как Австралия, США. Солнечные ожоги, полученные в детском и юношеском возрасте значительно увеличивают риск развития рака кожи и меланомы. К тому же, многократное чрезмерное ультрафиолетовое облучение приводит к сухости и преждевременному старению кожи, появлению пигментных пятен и даже развитию катаракты.

Симптомы солнечного ожога

 

  • Покрасневшая, горячая на ощупь кожа
  • Боль, отек
  • Пузыри
  • Повышенная температура
  • Озноб
  • Головная боль, головокружение, тошнота, слабость, учащенные пульс, дыхание (признаки солнечного удара)

Степень поражения кожи и симптомы солнечного ожога находятся в прямой зависимости от времени облучения и дозы УФ.

Наиболее опасны ожоги для людей с иммунодефицитом, употребляющих алкоголь, принимающих препараты, обладающие фотосенсибилизирующими свойствами.

Лица с определенными нарушениями пигментации кожи (например, альбиносы) и лица с особо светлой кожей имеют повышенный риск получить солнечные ожоги. В дерматологии выделяют шесть типов кожи с точки зрения их чувствительности к ультрафиолетовому излучению.

Типы 1 и 2: Высокая чувствительность

  • Первый тип – это блондины или рыжеволосые с очень светлой (бледной или молочно-белой) кожей (возможно с веснушками), которая никогда не загорает. Такие люди могут получить ожог, находясь под полуденным летним солнцем менее получаса.
  • Кожа второго типа чуть более темная, возможно с веснушками, способная приобрести легкий загар, но при непродолжительном пребывании на солнце легко обгорает.

Типы 3 и 4: Средняя чувствительность

  • Третий тип кожи (так называемый среднеевропейский) темнее, чем кожа второго типа. Пребывая на солнце, ее обладатели могут получить умеренный ожог или светло-коричневый загар.
  • Кожа четвертого типа оливкового цвета имеет низкий риск ожога. Хорошо загорает до средне-коричневого цвета.
  • Типы 5 и 6: Низкая чувствительность
  • Кожа 5 типа смуглая. Ожоги редки, загар темный.
  • Люди с кожей шестого типа имеют черную кожу и никогда не обгорают.

Первая помощь при солнечных ожогах

  1. 1.Немедленно спрячьтесь в тень. Покрасневшая кожа – это  симптомы солнечного ожога. Дальнейшее пребывание на солнце только усилит ожог.
  2. 2.Как и при любом ожоге, при солнечном ожоге, пострадавший участок кожи необходимо охладить. Для этого можно использовать холодную воду или водные растворы антисептиков (например, фурациллин, хлоргексидин). Если образовались пузыри – самостоятельно их вскрывать нельзя, следует наложить повязки с антисептиками и обратиться за медицинской помощью.
  3. 3.Необходимо обильное питье.
  4. 4.При большой площади солнечных ожогов и ухудшении общего состояния следует обратиться за медицинской помощью.
  5. 5.Ни в коем случае нельзя мазать пораженные места маслом, салом, мочой, спиртом, одеколоном и мазями и пр., не предназначенными для лечения ожогов. Использование таких средств может привести к ухудшению состояния, а также инфицированию кожи.
  6. 6.Регулярно увлажнять «сгоревшую» кожу специальными средствами, предназначенными для этого.
  7. 7.Носить свободную, максимально закрывающую от солнца из натуральных тканей одежду. Грубые ткани или синтетические материалы будут раздражать кожу.
  8. 8.Избегать открытого солнца, даже при использовании солнцезащитных кремов.

Профилактика солнечных ожогов

  • Ограничьте время пребывания на солнце, особенно с 10.00 до 16.00 часов.
  • Носите защитную одежду: широкополые шляпы, брюки, рубашки с длинным рукавом. Защищайте глаза — носите солнцезащитные очки (стеклянные либо непроницаемые для ультрафиолетовых лучей пластиковые линзы, что должно быть отражено на маркировке).
  • Используйте солнцезащитные крема за 20-30 минут до того, как выйти на солнце. Это позволит крему начать действовать. Обновляйте солнцезащитное средство как минимум раз в два часа и каждый раз поле купания.

Желаем Вам доброго здоровья и приятного отдыха!

 

Заведующий ожоговым отделением УЗ «ГКБСМП» В.Т.Лещенко

Клинические исследование кандидоз, оральный: glutaraldehyde disinfection and microwave application, Дезинфекция глюконатом хлоргексидина и применение микроволновой печи, Дезинфекция гипохлоритом натрия и применение микроволновой печи, дезинфекция глутаральдегидом и озонотерапия, Дезинфекция глюконатом хлоргексидина и озонотерапия, Дезинфекция гипохлоритом натрия и озонотерапия — Реестр клинических исследований

Тип вмешательства: Other

Название вмешательства: glutaraldehyde disinfection and microwave application

Описание: Combination of the chemical disinfection which could be done by patients and professional disinfection methods which is done by dentists

Этикетка Arm Group: glutaraldehyde disinfection and microwave application

Тип вмешательства: Другой

Название вмешательства: Дезинфекция глюконатом хлоргексидина и применение микроволновой печи

Описание: Сочетание химической дезинфекции, которую могут проводить пациенты, и методов профессиональной дезинфекции, которую проводят стоматологи.

Этикетка Arm Group: Дезинфекция глюконатом хлоргексидина и применение микроволновой печи

Тип вмешательства: Другой

Название вмешательства: Дезинфекция гипохлоритом натрия и применение микроволновой печи

Описание: Сочетание химической дезинфекции, которую могут проводить пациенты, и методов профессиональной дезинфекции, которую проводят стоматологи.

Этикетка Arm Group: Дезинфекция гипохлоритом натрия и применение микроволновой печи

Тип вмешательства: Другой

Название вмешательства: дезинфекция глутаральдегидом и озонотерапия

Описание: Сочетание химической дезинфекции, которую могут проводить пациенты, и методов профессиональной дезинфекции, которую проводят стоматологи.

Этикетка Arm Group: дезинфекция глутаральдегидом и озонотерапия

Тип вмешательства: Другой

Название вмешательства: Дезинфекция глюконатом хлоргексидина и озонотерапия

Описание: Сочетание химической дезинфекции, которую могут проводить пациенты, и методов профессиональной дезинфекции, которую проводят стоматологи.

Этикетка Arm Group: Дезинфекция глюконатом хлоргексидина и озонотерапия

Тип вмешательства: Другой

Название вмешательства: Дезинфекция гипохлоритом натрия и озонотерапия

Описание: Сочетание химической дезинфекции, которую могут проводить пациенты, и методов профессиональной дезинфекции, которую проводят стоматологи.

Этикетка Arm Group: Дезинфекция гипохлоритом натрия и озонотерапия

Чем обработать рану собаке, как лечить

Активные и любопытные собаки любой породы нередко получают повреждения. Риск травмироваться возрастает на прогулке, где питомец может не поладить с другими собаками или пораниться об острые предметы. Любая рана нарушает целостность кожных и слизистых покровов, и владельцу следует знать, чем обработать рану и в каком случае срочно требуется ветеринарный врач.

Основными признаками и симптомами ран являются: кровотечение, боль, расхождение краев кожи. Важно понимать, что процесс восстановления напрямую зависит от скорости оказания первой помощи и своевременного визита в ветеринарную клинику, если этого требует случай.

Из нашей статьи вы узнаете, какие раны и типы кровотечения бывают, как и чем их обрабатывать, что нужно знать о заживлении и как скорректировать рацион на время восстановления собаки.

Рваные раны

Рваная рана возникает при нарушении целостности тканей острыми предметами. Это могут быть: клыки и когти других животных, кусок железа или железной проволоки, камень. При этом острые предметы наносят рану в косом направлении в отличие от резаной раны с ровными краями. Кожа при такой ране порвана неровно и по краям расходится лоскутами.

Во время осмотра ветеринарный врач может наблюдать разорванные связки, сухожилия, мышцы, сосуды, фасции (соединительнотканная оболочка мышц, органов, сосудов, нервов).

В чем опасность? Такая рана становится благоприятной средой для развития инфекций, потому что на ее краях скапливается грязь, а рваные края долго срастаются. Существует большой риск возникновения воспалительного процесса.

Рваные раны зашивают в ветеринарной клинике, куда стоит обратиться как можно быстрее — до того, как началось воспаление.

Гнойные раны

Если рана возникла после хирургической операции и после первичной хирургической обработки, она считается чистой. Но после травмирования острыми относительно чистыми предметами при небольшом промежутке времени раны принято считать инфицированными. Когда степень бактериального загрязнения высока, и наблюдается выраженный воспалительный процесс, рана начинает гноиться.

Причины возникновения гнойных ран:
  • недостаточная гигиена при перевязке,
  • отсутствие ухода за швами,
  • низкий иммунитет собаки,
  • неправильное питание,
  • дефицит витаминов.
Симптомы и признаки, которые говорят о гнойном процессе:
  • наблюдается отек вокруг раны,
  • ткани рядом с раной становятся горячими,
  • собака скулит от боли при прикосновении,
  • повышается температура,
  • снижается аппетит,
  • общее состояние угнетенное.

Нагноению особенно подвержены закрытые раны с глубоким повреждением и узким входным отверстием. Из-за этого в рану не поступает воздух, и создаются подходящие условия для размножения патогенов.

Как лечить гнойные раны

Гнойные раны нельзя оставлять без внимания. Обязательно обратитесь за помощью к ветеринарному врачу, который назначит заживляющие препараты и проведет первичную обработку.

В чем заключается лечение?
  1. Сначала рану очищают. Для этого нужно размягчить засохшие корочки перекисью водорода и удалить их стерильным материалом.
  2. После этого рану открывают и удаляют из нее скопившийся гной.
  3. После очистки на поверхность раны накладывают заживляющий препарат, а затем стерильную повязку.

Важно не допускать, чтобы собака срывала повязку и вылизывала рану. Шершавый язык при вылизывании травмирует рану снова, к тому же возрастет риск занесения инфекции. Чтобы не беспокоиться на этот счет, используйте специальный воротник — он не позволит собаке дотянуться языком до раны.

Опасными симптомами при гнойных ранах являются: повышение температуры, вялость, отказ собаки от еды, судороги. В таком случае лучше не откладывать прием у ветеринарного врача — специалист подберет антибиотики и необходимые лекарства.

Поверхностные раны у собак и их обработка

Поверхностными ранами называют неглубокие повреждения на кожном покрове. При таких травмах владелец может справиться с лечением собаки самостоятельно. К поверхностным ранам можно отнести царапины, ссадины, неглубокие порезы. Они могут возникнуть на прогулке, если собака соприкоснется с каким-либо предметом, а также при активном вычесывании лапой колтунов или выгрызании блох.

Обработка поверхностной раны

Перед тем как начать обработку, необходимо тщательно вымыть руки и обработать их антисептиком.

Как обработать поверхностную рану питомцу:
  • очистить рану от инородных тел с помощью пинцета,
  • смочить хлоргексидином ватный диск и промыть рану от грязи легкими движениями,
  • ножницами удалить волоски вокруг раны,
  • остановить кровотечение перекисью водорода,
  • обработать края раны антисептиком,
  • наложить на рану повязку. Нажимать на рану нужно очень аккуратно, чтобы не причинить собаке лишнюю боль.

Антисептики для обработки ран у собак

Когда в доме появляется собака, владельцу стоит сразу завести аптечку для оказания первой помощи на случай чрезвычайных ситуаций. И хотя чаще всего дома есть какое-нибудь антисептическое средство для обработки ран, не все препараты для людей подходят для животных.

Медицинские антисептики, которые можно применять для обработки ран у собак:

Подойдет водный раствор хлоргексидина в концентрации 0,05%. Антисептик не проникает через кожный покров в кровоток и не щиплет при обработке раны. Его можно применять для щенков, беременных или кормящих собак. Хлоргексидином обеззараживают поверхностные и глубокие раны, расчесы, также обрабатывают швы после операций.

Антисептический раствор в концентрации 0,01% по своим антимикробным свойствам похож на хлоргексидин и обладает еще одним плюсом. Мирамистин способствует ускорению заживления тканей, уменьшая воспаление. Антисептик применяют для обеззараживания глубоких, открытых и гнойных ран. Обрабатывают ожоги, расчесы, швы. Мирамистин также не всасывается в кровоток и не оказывает влияние на внутренние органы собаки. Безопасен для кормящих собак и щенков любого возраста. При нанесении не раздражает кожу, но возможно легкое жжение, которое достаточно быстро проходит.

  • Перекись водорода

Главное преимущество, что перекись сгущает кровь в мелких сосудах, благодаря чему останавливается кровотечение. Второе преимущество в качественной очистке ран от загрязнения. Когда на рану наносится антисептик, образуется обильная пена, что хорошо удаляет из раны грязь, кровь, отмершие частички ткани.

Перекисью водорода обрабатывают поверхностные раны, чтобы очистить их от грязи и остановить кровь. Далее лечение проводят другими антисептиками: хлоргексидином или мирамистином. Это связано с тем, что перекись удлиняет процесс заживления и наносит вред здоровым клеткам.

Чтобы обработать поверхностные или загноившиеся раны, можно использовать фурацилин. Для обеззараживания антисептик применяют в виде водного раствора в концентрации 0,02%. Если дома есть только таблетки фурацилина, то раствор можно приготовить самостоятельно. Для этого одну таблетку фурацилина растворяют в 100 мл кипятка и остужают до комнатной температуры перед нанесением.

Не используйте спиртовые растворы для обеззараживания ран у собак — они травмируют здоровые клетки и вызывают ожог. К таким растворам относятся йод и зеленка.

Ветеринарные антисептики для собак

Антисептики для животных разработаны в той концентрации, которая безопасна для собак. Ветеринарные препараты способствуют быстрому заживлению ран и поддержанию местного иммунитета. Чтобы наносить антисептик было удобнее, их выпускают в виде спрея.

Перед нанесением вокруг раны выстригают шерсть. Затем кипяченой водой очищают поврежденное место от грязи, крови, гноя, отмерших частичек. И только потом средство наносят на рану, захватывая здоровый участок примерно на 1 см. После обработки любым антисептиком важно не позволять собаке зализывать рану.

Подобрать антисептики поможет ветеринарный врач. Советуем укомплектовать ими аптечку заранее, чтобы своевременно оказать первую помощь животному.

Кровотечения у собак: виды и первая помощь

Существует три вида кровотечений у собак:

  • Капиллярное: кровь сочится по всей поверхности раны. Кровотечение не обильное, поэтому большой опасности для жизни не представляет.

Первая помощь при капиллярном кровотечении: промыть рану от грязи хлоргексидином, остановить кровь перекисью водорода, наложить стерильную повязку. С обработкой раны при таком кровотечении владелец собаки может справиться самостоятельно.

  • Венозное: кровь темного цвета вытекает струей из раневого канала.

Первая помощь при венозном кровотечении: на рану накладывается давящая повязка. Для этого можно использовать твердый предмет, предварительно завернув его в стерильную марлю или бинт. Выше места повреждения накладывается жгут. При этом важно сохранять на ране давление, чтобы кровотечение не усилилось. При правильном наложении жгута пульс на поврежденной конечности не прощупывается. Для дальнейшей помощи собаку требуется отвезти в ветеринарную клинику.

  • Артериальное: ярко-алая кровь толчками бьет из раны струей.

Первая помощь при артериальном кровотечении: этот вид кровотечения останавливается жгутом. Подойдут такие подручные средства как ремень, платок, ошейник. Важно зафиксировать время наложения жгута и отвезти питомца как можно скорее к ветеринарному врачу. Зимой жгут можно держать до 1 часа, летом — до 30 минут. По истечении этого времени жгут ослабляют на 3 минуты.

Чтобы замедлить воспалительные процессы, при любых кровотечениях к ране прикладывается холодный компресс. Приложите холод на 30 минут и повторите процедуру несколько раз.

Процесс заживления ран у собак

Изменения, которые последовательно развиваются в ране и окружающих ее тканях, называют процессом заживления ран или раневым процессом. Выделяют три фазы заживления:

Фаза воспаления. Начинается с момента получения повреждения и длится до 5 дней. Во время сосудистых изменений, происходящих после травмы, развивается травматический отек. Затем происходит очищение раны от некротических тканей, и через 5-6 дней большая часть воспалительной реакции купируется.

Фаза регенерации, образования и созревания грануляционной ткани. Включает три процесса, которые протекают одновременно:

  • Образование коллагена, который вместе с волокнистыми структурами ликвидирует дефект тканей и обеспечивает прочность рубца.
  • Рост кровеносных и лимфатических сосудов. Активно растут новые капилляры и восстанавливается проходимость существовавших ранее, благодаря чему обеспечивается кровоснабжение новых тканей.
  • Рост эпителия. Эпителиальная ткань нарастает от краев раны к центру. Проходит отек и воспаление раны, прекращается выделение раневой жидкости.

Фаза образования рубца и реорганизации рубца. Происходит завершение заживления раны. Волокна коллагена образуют рубец.

Что влияет на продолжительность заживления?

  • размеры ранения,
  • степень повреждения тканей,
  • наличие инфекции в тканях,
  • состояние здоровья питомца,
  • возраст,
  • наличие заболеваний,
  • качество терапии.

Существуют разные виды заживления ран, которые зависят от наличия загрязнения, инфекции и характера повреждения. Различают три вида:

  • Заживление первичным натяжением

Заживление первичным натяжением происходит в относительно короткие сроки и характеризуется соединением краев раны без видимой промежуточной ткани путем нарастания в раневом канале соединительной ткани. Это возможно для ран с чистыми и ровными краями, в которых отсутствуют некротические ткани, гематомы и инфекции.

Рубец при таком заживлении чаще всего не образуется. Заживление по первичному типу считается наиболее благоприятным, функции поврежденных тканей восстанавливаются полностью. По такому типу заживают раны после операций или свежие раны, которые прошли хирургическую обработку.

  • Заживление вторичным натяжением

Если заживлению препятствуют дефекты тканей (края раны находятся далеко друг от друга), инфекции, нарушения кровообращения, то такой вид заживления будет вторичным. В таких ранах образуется нагноение, которое способствует очищению раны. Развивается грануляционная ткань — особый вид соединительной ткани, которая имеет мелкозернистую структуру. Поверхностный слой грануляционной ткани препятствует проникновению в рану инфекции.

Рана уменьшается в объеме, начинается эпителизация. К концу процесса заживления рана полностью покрывается грануляциями, края и стенки раны сокращаются, эпителизация завершается. Постепенно грануляционная ткань трансформируется в соединительную, формируется рубец.

  • Заживление под струпом

После ранения начинается свертывание крови, которая подсыхает и образует струп (корочку). Струп защищает рану от инфекций и благоприятно влияет на процесс заживления. Под струпом заживают только поверхностные раны (ссадины, царапины). Рана заживает около 7 дней, происходит быстрая эпителизация. Затем корочка отпадает.

Диета для собаки после ранения

В период заживления ран в организме собаки начинаются процессы, направленные на борьбу с воспалением и регенерацию поврежденных тканей. Животное в этот период теряет много сил, его иммунитет ослаблен. Чтобы поддержать здоровье и восстановить силы, стоит уделить особое внимание питанию собаки.

Рацион питания изменять не рекомендуется, но важно обеспечить питомца дополнительными витаминами и питательными веществами. Для этого подойдет специальная ветеринарная диета

Поделиться

Хлоргексидин — обзор | ScienceDirect Topics

3.4.4 Предварительная обработка субстрата

Одно исследование показало, что преимущества хлоргексидина при лечении пародонтита были результатом ингибирования активности матриксных металлопротеиназ (ММП) хлоргексидином (Gendron et al., 1999). ). ММП представляют собой эндопептидазы, способные разрушать компоненты внеклеточного матрикса (Martin-De Las Heras et al., 2000; Sulkala et al., 2002; Mazzoni et al., 2006). До того, как его испытали в качестве потенциального ингибитора MMP в адгезии дентина, хлоргексидин сначала использовали в качестве дезинфицирующего средства для дентина перед нанесением стоматологических адгезивов. При СЭМ остатки хлоргексидина прикреплялись к протравленной поверхности дентина после полоскания, но хлоргексидин не влиял на прочность сцепления с дентином при сдвиге (Perdigão et al., 1994).

Хлоргексидин недавно изучали в качестве ингибитора протеазы для сохранения гибридного слоя посредством ингибирования ММП (Pashley et al., 2004). Коллагеновые фибриллы дентина могут подвергаться деградации под действием MMP, если они не полностью покрыты смолой (Mazzoni et al., 2006). Дентин человека содержит желатиназу (ММР-2 и-9), коллагеназу (ММР-8) и эмализин ММР-20 (Martin-De Las Heras et al., 2000; Sulkala et al., 2002; Mazzoni et al. и др., 2006). Эти ферменты задерживаются в минерализованной матрице дентина во время развития зуба (Martin-De Las Heras et al., 2000; Sulkala et al., 2002).

Использование хлоргексидина приводит к сохранению прочности связи с дентином и целостности гибридного слоя с течением времени (Hebling et al., 2005; Carrilho et al., 2007; Ricci et al., 2010). ). При использовании фосфорной кислоты с 2% диглюконата хлоргексидина значительного снижения силы сцепления не наблюдалось для Adper Single Bond Plus (3 M ESPE) и Prime&Bond NT (Dentsply) через шесть месяцев. С другой стороны, когда хлоргексидин не был включен в состав травителя, наблюдалось значительное снижение силы сцепления обоих клеев через шесть месяцев и через два года (Stanislawczuk et al., 2009, 2011). Наноутечка более выражена при использовании геля фосфорной кислоты без хлоргексидина.

Использование хлоргексидина в качестве ингибитора ММР приводит к интактному гибридному слою после 12 месяцев старения in vivo . Однако сохранение гибридного слоя может происходить в отсутствие ингибиторов ММР (Sadek et al., 2010). Кроме того, использование хлоргексидина не удаляет воду из связующего слоя и не предотвращает гидролиз слоя клея на верхней части водонасыщенной поверхности гибридного слоя (Brackett et al., 2011).

Хлоргексидин (пероральный путь) Описание и торговые названия

Описание и торговые марки

Информация о лекарствах предоставлена: IBM Micromedex

Торговая марка США

  1. Пароекс
  2. Перидекс
  3. Периогард

Описание

Хлоргексидин используется для лечения гингивита. Это помогает уменьшить воспаление (покраснение) и отек десен, а также уменьшить кровоточивость десен.

Гингивит вызывается бактериями, которые размножаются в покрытии (налете), образующемся на зубах между чистками зубов.Хлоргексидин уничтожает бактерии, тем самым предотвращая возникновение гингивита. Однако хлоргексидин не препятствует образованию налета и зубного камня; Правильная чистка зубов и использование зубной нити по-прежнему необходимы и важны.

Хлоргексидин доступен только по рецепту вашего стоматолога или врача.

Этот продукт доступен в следующих лекарственных формах:

Получите самую свежую медицинскую информацию от экспертов Mayo Clinic.

Зарегистрируйтесь бесплатно и будьте в курсе последних научных достижений, советов по здоровью и актуальных тем, связанных со здоровьем, таких как COVID-19, а также экспертных знаний по управлению здоровьем.

Узнайте больше об использовании данных Mayo Clinic.

Чтобы предоставить вам наиболее актуальную и полезную информацию, а также понять, какие информация полезна, мы можем объединить вашу электронную почту и информацию об использовании веб-сайта с другая информация о вас, которой мы располагаем.Если вы пациент клиники Майо, это может включать защищенную информацию о здоровье. Если мы объединим эту информацию с вашей защищенной медицинской информации, мы будем рассматривать всю эту информацию как информацию и будет использовать или раскрывать эту информацию только так, как указано в нашем уведомлении о практики конфиденциальности. Вы можете отказаться от получения сообщений по электронной почте в любое время, нажав на ссылка для отписки в письме.

Подписаться!

Спасибо за подписку

Наш электронный информационный бюллетень Housecall будет держать вас в курсе последней медицинской информации.

Извините, что-то пошло не так с вашей подпиской

Повторите попытку через пару минут

Повторить попытку

Последнее обновление частей этого документа: февр.01, 2022

Copyright © 2022 IBM Watson Health. Все права защищены. Информация предназначена только для использования Конечным пользователем и не может быть продана, перераспределена или иным образом использована в коммерческих целях.

.

Пероральное воздействие хлоргексидина на биопленки приводит к изменению микробного состава и метаболического профиля

  • Консорциум, T. H. M. P. Структура, функции и разнообразие микробиома здорового человека. Природа 486 , 207–214 (2012).

    Google ученый

  • Hezel, M.P. & Weitzberg, E. Микробиом полости рта и гомеостаз оксида азота. Оральный дис. 21 , 7–16 (2015).

    КАС пабмед Google ученый

  • Розье, Б. Т., Марш, П. Д. и Мира, А. Устойчивость микробиоты полости рта в здоровом состоянии: механизмы, предотвращающие дисбиоз. Дж. Дент. Рез. 97 , 371–380 (2017).

    ПабМед Google ученый

  • Bergstrom, J. Уровень курения и распространенность заболеваний пародонта: 40-летние тенденции в Швеции, 1970–2010 гг. Дж. Клин. Пародонтол. 41 , 952–957 (2014).

    ПабМед Google ученый

  • Moynihan, P.J. & Kelly, S.A.M. Влияние ограничения потребления сахара на кариес: систематический обзор рекомендаций ВОЗ по информированию. Дж. Дент. Рез. 93 , 8–18 (2014).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Donnell, G. M. C. Антисептики и дезинфицирующие средства: активность, действие и устойчивость. клин. микробиол. 12 , 147–179 (1999).

    Google ученый

  • Mcbain, A.J. et al. Влияние жидкости для полоскания рта, содержащей хлоргексидин глюконат, на жизнеспособность и восприимчивость к противомикробным препаратам in vitro оральных бактериальных экосистем. Заяв. Окружающая среда. микробиол. 69 , 4770–4776 (2003).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Zaura-Arite, E., van Marle, J. & ten Cate, J.M. Исследование конофокальной микроскопии неповрежденной и обработанной хлоргексидином зубной биопленки. Дж. Дент. Рез. 80 , 1436–1440 (2001).

    КАС пабмед Google ученый

  • Турнхер, Т., Гму, Р. и Гуггенхайм, Б. Мультиплексный анализ FISH шести видов бактериальной биопленки. J. Microbiol. Методы 56 , 37–47 (2004).

    КАС пабмед Google ученый

  • Гуггенхаймрл, Б., Гирсен, Э., Шупбахл, П. и Шапироль, С. Валидация модели биопленки наддесневого налета in vitro. Дж. Дент. Рез. 80 , 363–370 (2001).

    Google ученый

  • Праттен, Дж., Барнетт П. и Уилсон М. Состав и чувствительность к хлоргексидину многовидовых биопленок бактерий полости рта. Заяв. Окружающая среда. микробиол. 64 , 3515–3519 (1998).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Seneviratne, C.J. et al. Хлоргексидин, инкапсулированный в наночастицы, против бактериальных биопленок в полости рта. PLoS ONE 9 , e103234 (2014).

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Пейяла, Р., Киракоду С.С., Эберсоле Дж.Л. и Новак К.Ф. Новая модель многовидовых биопленок, в которой используются жесткие газопроницаемые линзы. Заяв. Окружающая среда. микробиол. 77 , 3413–3421 (2011).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Коммерейн, Н. и др. Модель многовидовой биопленки полости рта для приложений скрининга с высоким содержанием. PLoS ONE 12 , e0173973 (2017).

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Чан, Х.С. Дж., Саймонс, М. Н. и Маранас, К. Д. SteadyCom: прогнозирование численности микробов при обеспечении стабильности сообщества. Вычисление PLoS. биол. 13 , e1005539 (2017).

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Fernandez y Mostajo, M. et al. Воспроизводимая микрокосмическая биопленочная модель поддесневых микробных сообществ. J. Периодонтальная рес. 52 , 1021–1031 (2017).

    КАС пабмед Google ученый

  • Нэнси, В.С. и др. Высокопроизводительная микрожидкостная биопленочная система зубного налета для визуализации и количественной оценки действия противомикробных препаратов. J. Антимикроб. Чемотер. 68 , 2550–2560 (2013).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Shen, Y. et al. Экспериментальное и теоретическое исследование устойчивости многовидовых биопленок полости рта к лечению хлоргексидином. науч. Респ. 6 , 27537 (2016).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Fernandez y Mostajo, M., Exterkate, R. A. M., Buijs, M. J., Crielaard, W. & Zaura, E. Влияние жидкостей для полоскания рта на состав и метаболическую активность пероральных биопленок, выращенных in vitro. клин. Оральное расследование. https://doi.org/10.1007/s00784-016-1876-2 (2016 г.).

  • Газанига, Л., Рибейро, М., Хашизуме, Л. Н. и Мальц, М. Влияние различных составов хлоргексидина на снижение уровня мутантных стрептококков в полости рта: систематический обзор литературы. Дж. Дент. 35 , 359–370 (2007).

    Google ученый

  • Квинтас, В., Прада-Лопес, И., Донос, Н., Суарес-Кинтанилья, Д. и Тома, И. Нейтрализация in situ антибактериального действия 0,2% хлоргексидина на микробиоту слюны: количественная оценка субстанции . Арх. Оральный. биол. 60 , 1109–1116 (2015).

    КАС пабмед Google ученый

  • Гарсия-Кабальеро, Л.и другие. Влияние хлоргексидина на флору слюны и бляшкообразную биопленку: модель in situ. PLoS ONE 8 , 1–10 (2013).

    Google ученый

  • Такахаши, Н. Метаболизм микробиома полости рта: из «Кто они?» на «Что они делают?». Крит. Преподобный Орал. биол. Мед. 94 , 1628–1637 (2015).

    КАС Google ученый

  • Диас, П.И. и др. Молекулярная характеристика предметно-специфической микрофлоры полости рта при начальной колонизации эмали. Заяв. Окружающая среда. микробиол. 72 , 2837–2848 (2006).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • de Soet, JJ, Nyvad, B. & Kilian, M. Выработка кислоты пероральным путем, связанная со штаммом. Кариес Res. 34 , 486–490 (2000).

    ПабМед Google ученый

  • Марк, Дж.Л., Россетти, Б.Дж., Рикен, К.В., Дьюхерст, Ф.Е. и Бориси, Г.Г. Биогеография микробиома ротовой полости человека в микронном масштабе. ПНАС 791–800 (2016). https://doi.org/10.1073/pnas.1522149113.

  • Li, Y. et al. Филогенетические и функциональные сдвиги генной структуры микробиома полости рта у больных пародонтитом. ISME J. 8 , 1879–1891 (2014).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Рокас, И.Н. и Сикейра, Дж. Ф. Микробиота корневых каналов зубов с хроническим апикальным периодонтитом. Дж. Клин. микробиол. 46 , 3599–3606 (2008).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Джорт П., Тернер К. Х., Гумус П., Низам Н. и Будунели Н. Метатранскриптомика микробиома полости рта человека в норме и при болезни. MBio 5 , e01012–e01014 (2014 г.).

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Чанг М.-С. и другие. Бутират индуцирует выработку активных форм кислорода и влияет на ход клеточного цикла в фибробластах десен человека. J. Периодонтальная рес. 48 , 66–73 (2013).

    КАС пабмед Google ученый

  • Лю, Дж. и др. Бутират, а не LPS, нарушает гомеостаз эпителия десны, подавляя межклеточные соединения и вызывая пироптоз. Дж. Клин. Пародонтол. 46 , 894–907 (2019).

    КАС пабмед Google ученый

  • Filoche, S. K., Soma, D., Van Bekkum, M. & Sissons, C. H. Бляшки у разных людей вызывают разные реакции микробиоты на антисептическую обработку полости рта. ФЭМС Иммунол. Мед. микробиол. 54 , 27–36 (2008).

    КАС пабмед Google ученый

  • Биззарро, С. и др. Микробный профиль на исходном уровне, а не применение антибиотиков, определяют клинический исход лечения хронического периодонтита. науч. 6 , 1–13 (2016).

    Google ученый

  • Аль-камель, А. и др. Поддесневой микробиом экспериментального гингивита: сдвиги, связанные с использованием хлоргексидина и N-ацетилцистеина для полоскания рта. J. Oral Microbiol. 11 , 1608141 (2019).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Лю Г.и другие. Сдвиг в поддесневом микробиоме после удаления зубного камня и полировки корней при генерализованном агрессивном пародонтите. Дж. Клин. Пародонтол. 45 , 440–452 (2018).

    КАС пабмед Google ученый

  • Verspecht, T. et al. Развитие антисептической адаптации и перекрестной адаптации у отдельных оральных патогенов in vitro. науч. Реп . https://doi.org/10.1038/s41598-019-44822-y (2019 г.).

  • Мюллер, Х.Д., Эйк С., Мориц А., Лусси А. и Грубер Р. Цитотоксичность и антимикробная активность ополаскивателей для полости рта in vitro. Биомед. Рез. Междунар. 2017 , 4019723 (2017).

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Page, R.C. et al. Иммунизация Macaca fascicularis против экспериментального периодонтита с использованием вакцины, содержащей цистеиновые протеазы, очищенные от Porphyromonas gingivalis. Пероральный микробиол.Иммунол. 22 , 162–168 (2007).

    КАС пабмед Google ученый

  • Teughels, W. et al. Клинические и микробиологические эффекты пробиотиков Lactobacillus reuteri при лечении хронического пародонтита: рандомизированное плацебо-контролируемое исследование. Дж. Клин. Пародонтол. 40 , 1025–1035 (2013).

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Лопес-Лопес, А., Камело-Кастильо, А., Феррер, доктор медицинских наук, Симон-Соро, А. и Мира, А. Обитатели ниши, связанные со здоровьем, в качестве пероральных пробиотиков: случай Streptococcus dentisani. Перед. микробиол. 8 , 1–12 (2017).

    Google ученый

  • Сломка В. и др. Пищевая стимуляция комменсальных бактерий полости рта подавляет патогены: концепция пребиотиков. Дж. Клин. Пародонтол. 44 , 344–352 (2017).

    КАС пабмед Google ученый

  • Экстеркате Р.AM, Crielaard, W. & Ten Cate, JM. Различная реакция на аминофторид Streptococcus mutans и полимикробных биопленок в новой высокопроизводительной модели активного прикрепления. Кариес Res. 44 , 372–379 (2010).

    КАС пабмед Google ученый

  • Ван Невел, С., Кетч, С., Вейленманн, Х., Бун, Н. и Хаммес, Ф. Рутинный бактериальный анализ с помощью автоматизированной проточной цитометрии. J. Microbiol.Методы 94 , 73–76 (2013).

    ПабМед Google ученый

  • Loozen, G., Boon, N., Pauwels, M., Quirynen, M. & Teughels, W. Живая/мертвая полимеразная цепная реакция в реальном времени для оценки новых методов лечения патологий, связанных с зубным налетом. Мол. Oral Microbiol 26 , 253–261 (2011).

    КАС пабмед Google ученый

  • Эрреро, Э.Р. и др. Дисбиотические биопленки нарушают регуляцию пародонтальной воспалительной реакции. Дж. Дент. Рез. 97 , 547–555 (2018).

    КАС пабмед Google ученый

  • Клиндворт, А. и др. Оценка общих праймеров для ПЦР гена рибосомной РНК 16S для классических исследований и исследований разнообразия на основе секвенирования следующего поколения. Nucleic Acids Res 41 , 1–11 (2013).

    Google ученый

  • Ван, К., Garrity, GM, Tiedje, JM, Cole, JR & Al, WET Наивный байесовский классификатор для быстрого отнесения последовательностей рРНК к новой бактериальной таксономии. Заяв. Окружающая среда. микробиол. 73 , 5261–5267 (2007).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • McMurdie, P.J. & Holmes, S. Не тратить, не хотеть: почему недопустимо разреживание данных о микробиоме. Вычисление PLoS. биол. 10 , e1003531 (2014).

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Mcmurdie, P. J. & Holmes, S. phyloseq: пакет R для воспроизводимого интерактивного анализа и графики данных переписи микробиома. PLoS ONE 8 , e61217 (2013).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Границы | Низкие концентрации хлоргексидина ингибируют образование и структурную целостность обработанных ферментом многовидовых биопленок полости рта

    Введение

    Биопленки определяются как заключенные в матрикс бактериальные популяции, слипшиеся друг с другом и/или с поверхностями или интерфейсами (Costerton et al., 1995). В стоматологии биопленки вызывают множественные заболевания полости рта, такие как пародонтит или кариес, которые составляют наиболее распространенные инфекционные заболевания полости рта и основные причины потери зубов (Sanz et al., 2017). Первоначально бактериальные клетки прикрепляются к покрытой пленкой поверхности зубов 90–106 посредством 90–107 различных рецепторных белков (Kolenbrander et al., 2010). Клетки в биопленке встроены в самопродуцируемый матрикс, состоящий из внеклеточных полимерных веществ (EPS), таких как экзополисахариды, белки, внеклеточная ДНК (eDNA) и липиды (Flemming and Wingender, 2010).Функции матрикса биопленки разнообразны и включают адгезию к биотическим и абиотическим поверхностям, сцепление, каркас и защиту от противомикробных препаратов и рассеивания (Flemming, 2016; Flemming et al., 2016). Еще одна ключевая функция матрицы биопленки — удерживать питательные вещества и воду для предотвращения высыхания (Marsh, 2005). В нашей работе мы сосредоточились на двух ЭПС, а именно на эДНК и белках, которые оба служат матричными компонентами. Многие исследования показывают, что эДНК играет важную роль в структурной стабильности на ранней стадии формирования биопленки (Whitchurch et al., 2002; Шлафер и др., 2017). eDNA образует нановолокна, соединяющие клетки с субстратом или другими клетками в биопленке, тем самым механически стабилизируя биопленку (Liao et al., 2014). Имеются данные о том, что эДНК высвобождается через мембранные везикулы при активации различных механизмов, включая лизис клеток и активную секрецию (Jakubovics et al., 2013; Liao et al., 2014). Также известно, что бактерии в биопленках более устойчивы к антимикробным агентам, чем в планктонной фазе, что можно объяснить разными механизмами (Flemming et al., 2016). Например, благодаря своему отрицательному заряду эДНК может связывать катионные противомикробные препараты, такие как хлоргексидин (CHX; Okshevsky and Meyer, 2015). Другим механизмом толерантности биопленки к CHX является активация насосов оттока многих лекарств, которые представляют собой мембранные белки, содержащие несколько трансмембранных доменов, которые позволяют элиминировать противомикробные препараты и антибиотики из цитоплазмы. Эти белки были обнаружены у грамположительных Staphylococcus aureus и у грамотрицательных Pseudomonas aeruginosa (Cieplik et al., 2019). Разнообразные функции белков матрикса были показаны в нескольких исследованиях и включают, например, связывание эДНК (Kavanaugh et al., 2019) или формирование каркаса матрикса путем образования амилоидных волокон (Romero and Kolter, 2014; Erskine et al., 2018).

    Использование ферментов или других агентов для разрушения матрикса биопленки может стать многообещающим подходом к борьбе с биопленками в будущем (Jakubovics et al., 2013; Kostakioti et al., 2013; Nguyen et al., 2014). Это может привести к появлению новых подходов к лечению, особенно в области кариологии, пародонтологии, эндодонтии или даже протезирования, за счет изменения архитектуры биопленок и, таким образом, повышения восприимчивости биопленок к противомикробным препаратам — даже в низких концентрациях.Например, обработка ДНКазой I может значительно уменьшить рост биопленки P. aeruginosa и Streptococcus mutans (Whitchurch et al., 2002; Liao et al., 2014). Шлафер и др. (2017) показали, что обработка ДНКазой I биопленок, выращенных in vivo , может уменьшить биообъем биопленок в статистически значимом диапазоне. Другое исследование показало, что обработка биопленок S. aureus протеиназой К может снижать раннюю микробную адгезию, усиливать распространение бактериальных клеток и повышать чувствительность к различным антибиотикам (Kumar Shukla and Rao, 2013).В недавно опубликованном исследовании мы проверили комбинированное действие ДНКазы I и протеиназы К в качестве примеров «антиматриксных» агентов на многовидовую оральную биопленку (Karygianni et al., 2020a). В этом исследовании было показано, что совместное применение ДНКазы I и протеиназы К повлияло на снижение общего количества колониеобразующих единиц (КОЕ) и на структуру биопленки. Цель настоящего исследования состояла в том, чтобы изучить влияние CHX на биопленки, обработанные ДНКазой I/протеиназой K, таким образом объединив противомикробные агенты с «антиматричными» агентами с использованием «Цюрихской модели биопленки».Таким образом, помимо ферментов, разрушающих матрикс, биопленки подвергались воздействию высоких (≥0,1%) и низких (<0,1%) концентраций CHX (Serrano et al., 2015). Поэтому мы количественно определили КОЕ и визуализировали биопленки с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (КЛСМ), чтобы показать изменения в структуре и составе многовидовых биопленок полости рта. Насколько нам известно, комбинированный эффект ДНКазы I, протеиназы К и CHX до сих пор никогда не изучался в оральной in vitro многовидовой биопленке.Нулевая гипотеза этого исследования заключалась в том, что нет никакой разницы в микробном росте между обработанными ферментами биопленками и необработанными биопленками при воздействии высоких (≥0,1%) и низких (<0,1%) концентраций CHX.

    Материалы и методы

    Формирование многовидовых наддесневых биопленок

    Формирование биопленки, состоящей из шести видов микроорганизмов, обычно встречающихся в наддесневых биопленках, проводили in vitro , как подробно описано ранее (Shapiro et al., 2002; Thurnheer и др., 2003, 2006, 2014). Вкратце, S. Mutans OMZ 918 , Streptococcus Oralis OMZ 607 , Actinomyces Oris , OMZ 745 , Veellonella Dispar OMZ 493 , Fusobacterium Nucleatum OMZ 598, и Candida Albicans OMZ 110 были использованы для BiOfilm формирование. Все штаммы содержались на колумбийском кровяном агаре (CBA). Перед началом экспериментов с биопленками все штаммы переносили в модифицированную жидкую универсальную среду (mFUM; Gmür and Guggenheim, 1983) и инкубировали в анаэробных условиях при 37°C в течение двух циклов прекультивирования (16 и 8 ч соответственно).Для получения инокулята все штаммы доводили до определенной оптической плотности (ОП) при 550 нм (ОП 550 = 1,0) и смешивали в равных объемах (1 мл).

    Экспериментальные биопленки выращивали в 24-луночных планшетах для культивирования клеток из полистирола на спеченных гидроксиапатитовых дисках (Ø 9 мм; Clarkson Chromatography Products, Inc. South Williamsport, PA 17702, США), предварительно кондиционированных в 800 мкл пастеризованной цельной нестимулированной объединенной слюны человека ( далее «слюна») от доноров отделения клинической оральной микробиологии и иммунологии Цюрихского университета с их согласия и инкубировали при комнатной температуре в течение 4 часов при осторожном встряхивании со скоростью 95 об/мин, чтобы обеспечить образование пленки на дисках.Подробная процедура сбора и обработки слюны была ранее описана в другом месте (Guggenheim et al., 2001).

    Чтобы разрушить матрикс биопленки и предотвратить образование биопленки, ДНКаза I (из поджелудочной железы крупного рогатого скота; Sigma-Aldrich, Buchs, Швейцария), протеиназа K (из Engyodontium album ; Sigma-Aldrich) и раствор хлоргексидина диглюконата (CHX , Sigma-Aldrich). Экспериментальная установка включала четыре лечебные группы, каждая из которых была разделена на две подгруппы, в которых среда для выращивания либо не содержала ферментов, либо содержала ДНКазу I + протеиназу K (таблица 1): группу А обрабатывали 0.05% CHX, группа B с 0,1% CHX; группа C с 0,2% CHX, а группа D не подвергалась лечению и служила отрицательным контролем. Время воздействия и время инкубации, а также концентрации ферментов были оптимизированы в предварительных экспериментах (данные не показаны). Питательная среда содержала 70 % слюны и 30 % мФУМ с добавлением буфера Серенсена (pH 7,2). Для тех биопленок, которые обрабатывали ДНКазой I и протеиназой K, исходный раствор каждого фермента добавляли к среде, что приводило к конечной концентрации 0.0,02 мг/мл для ДНКазы I и 0,1 мг/мл для протеиназы K. Концентрация углеводов mFUM составляла 0,3% глюкозы (вес/объем; 0–16 ч культивирования биопленки) или 0,15% глюкозы и 0,15% сахарозы (16–64 ч). Чтобы инициировать эксперимент с биопленкой, диски покрывали 1,6 мл питательной среды и 200 мкл инокулята перед анаэробной инкубацией при 37°C. Питательную среду меняли через 16 и 40 часов. Через 16, 20 и 24 ч, а также через 40, 44 и 48 ч диски помещали в 1 мл CHX в соответствующей концентрации на 1 мин (см. группы лечения в таблице 1).Чтобы удалить неприлипшие микроорганизмы и оставшийся CHX, биопленки промывали путем последовательного трехкратного погружения их в 2 мл физиологического раствора перед помещением их обратно в среду.

    Таблица 1 . Распределение биопленок на восемь различных лечебных групп.

    После 64 часов роста биопленки биопленки промывали, как описано, и собирали для культурального анализа или подвергали окрашиванию и CLSM (см. ниже).

    Анализ культур и подсчет КОЕ

    Для культурального анализа диски помещали в пробирку и интенсивно встряхивали в течение 1 мин в 1 мл 0.9% NaCl для сбора прилипших биопленок. После вортексирования собранные биопленки обрабатывали ультразвуком мощностью 30 Вт в течение 5 с (Sonifier B-12, Branson Ultrasonic, Урдорф, Швейцария), чтобы гарантировать диспергирование микроорганизмов. Полученные бактериальные суспензии серийно разбавляли 0,9% раствором NaCl. Аликвоты по 50 мкл каждого разведения высевали на CBA (Oxoid Ltd., Basingstoke, United Kingdom) с добавлением 5% цельной крови человека для оценки общего количества КОЕ. Для определения КОЕ видов в биопленке использовали селективные агары, как описано ранее (Guggenheim et al., 2001; Клинке и др., 2011). Вкратце, чашки CBA использовали для подсчета общего числа бактерий и подсчета A. oris и V. dispar . Дифференциальный подсчет S. mutans и S. oralis проводили с использованием агара Mitis Salivarius (Difco Laboratories, Inc., Детройт, Мичиган) с добавлением 0,001% (масса/объем) теллурита натрия, тогда как селективный рост F. nucleatum был получен с использованием привередливого анаэробного агара (Chemie Brunschwig, Базель, Швейцария).Наконец, для подсчета 90–106 C. albicans использовали агар BIGGY (BBL, Becton Dickinson, Allschwil, Швейцария). Чашки с агаром инкубировали либо в анаэробных условиях для чашек с CBA и агаром Fastidious Anaerobe Agar, либо в аэробных условиях с добавлением 10% CO 2 для чашек с агаром BIGGY и Mitis, при 37°C в течение 72 часов. Виды идентифицировали путем наблюдения за морфологией колоний с помощью стереолупы. Наконец, была проведена фазово-контрастная микроскопическая идентификация клеток из выбранных колоний.

    Окрашивание биопленки для анализа CLSM

    Для визуализации биопленки использовали два различных метода окрашивания.Первый включал окрашивание всех бактерий и различных компонентов матрикса, таких как внеклеточная ДНК (eDNA), внеклеточные полисахариды (EPS) и внеклеточные белки, тогда как второй был направлен на визуализацию либо целых, либо разорванных клеточных мембран с использованием LIVE/DEAD BacLight. Набор для определения жизнеспособности бактерий.

    Перед окрашиванием тотальных бактерий и компонентов матрикса биопленки фиксировали в 1 мл 4% параформальдегида + ингибитор РНКазы (РНКи; Sigma-Aldrich) в течение 2 ч при 4–8°C.После фиксации диски промывали 500 мкл 0,9% NaCl + РНКи и вытирали бумажным полотенцем. Тотальную ДНК окрашивали смесью 3 мкМ йодида YoPro 1 (Thermo Fisher Scientific, Базель, Швейцария) и 15 мкМ SYTOX Green (Thermo Fisher Scientific) в наночистой воде в течение 30 мин в темноте при комнатной температуре. Внеклеточные полисахариды окрашивали путем инкубации биопленок с флуоресцентным осветлителем 28 (Calcofluor; Sigma-Aldrich; раствор 10 мкг/мл в 10 мМ фосфате натрия, pH 7,5) в течение 30 минут в темноте при комнатной температуре.Внеклеточную ДНК (вДНК) визуализировали с помощью непрямого иммунофлуоресцентного анализа (мышиный анти-ДНК IgG (Sigma-Aldrich), козий анти-мышиный IgG (Thermo Fisher Scientific) и стрептавидин-Cy3 (GeneTex, Люцерн, Швейцария) в соответствии с инструкцией производителя). рекомендации, а внеклеточные белки окрашивали красителем SYPRO Ruby Protein Gel Stain (Thermo Fisher Scientific) в соответствии с протоколами производителя.

    Биопленки, окрашенные с помощью набора LIVE/DEAD BacLight Bacterial Viability Kit (L7007; Thermo Fisher Scientific), не были зафиксированы до окрашивания.Биопленки окрашивали SYTO9 и йодидом пропидия в соответствии с инструкциями производителя.

    После окрашивания образцы промывали и помещали вверх дном на предметные стекла камеры в 50 мкл Mowiol (Thurnheer et al., 2003).

    Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия

    CLSM проводили с использованием микроскопа Leica TCS SP5 (Leica Microsystems, Wetzlar, Germany), предоставленного Центром микроскопии и анализа изображений Цюрихского университета. Для визуализации биопленок на гидроксиапатите используется слегка модифицированная процедура, описанная ранее (Zehnder et al., 2017 г.). Вкратце, использовались следующие лазеры: УФ-лазер с возбуждением 405 нм, аргоновый лазер с возбуждением 488 нм, диодный лазер DPSS с возбуждением 561 нм и гелий-неоновый лазер с возбуждением 633 нм. Кроме того, фильтры были настроены на 420–470 нм для обнаружения Calcofluor, на 495–555 нм для YoPro1/SYTOX Green и SYTO9, на 575–620 нм для Cy3 и йодида пропидия и на 650–720 нм для SYPRO Ruby Protein. Гелевое пятно. Для визуализации всех бактерий и компонентов матрикса используют масляный иммерсионный объектив x100 (числовая апертура 1.4), и биопленки сканировали последовательно с шагом в 0,5 мкм. Окрашенные LIVE/DEAD биопленки исследовали с использованием масляного иммерсионного объектива x63 (числовая апертура 1,4) и биопленки сканировали последовательно с шагом 0,29 мкм. Наконец, изображения были обработаны с помощью Imaris 64 8.4.1 (Bitplane, Цюрих, Швейцария).

    Статистический анализ

    Все эксперименты были проведены дважды в трех повторностях, в результате чего было получено n =6 образцов в каждой группе. Двухфакторный дисперсионный анализ использовали для анализа различий в бактериальных клетках на биопленку между контрольной группой (стандартная биопленка из шести видов) и различными обработками либо с CHX в разных концентрациях отдельно, либо в комбинации с ДНКазой I/протеиназой K.Для коррекции использовали тест множественных сравнений Тьюки. Отсутствующие значения были отнесены к самому низкому значению предела обнаружения анализа, чтобы сделать возможным логарифмическое преобразование. Статистические данные были реализованы с использованием программного обеспечения GraphPad Prism (версия 7; Ла-Хойя, Калифорния, США) для сравнения общего количества клеток видов в различных образованиях биопленки. Уровень значимости был установлен на уровне 90×106 p 90×107 <0,05.

    Результаты

    Комбинированная обработка с CHX и ДНКазой I/протеиназой K уменьшает образование биопленки

    На рис. 1 показан комбинированный эффект CHX и ферментативной обработки протеиназой K и ДНКазой I на количество log 10 КОЕ наддесневых биопленок, состоящих из шести видов, выращенных в течение 64 часов in vitro .Использование 0,05% CHX вместе с 0,002 мг/мл ДНКазы I и 0,1 мг/мл протеиназы K привело к значительному снижению общего микробного числа (в среднем 3,88±1,09 log 10 КОЕ; p <0,0001) по сравнению с таковые биопленок, обработанных только 0,05% CHX (в среднем, 6,44 ± 0,93 log 10 КОЕ). Такой же эффект был измерен для пяти отдельных микробных видов (значения log 10 КОЕ и p приведены в таблице 2). Единственным исключением был F. nucleatum (в среднем 2.58±1,11 log 90 627 10 90 628 КОЕ, 90 106 p 90 107 = 0,208), для которых не наблюдалось значительного снижения по сравнению с биопленкой, обработанной 0,05% CHX (в среднем 3,51 ± 1,93 log 90 627 10 90 628 КОЕ). По сравнению с контролем (7,95±0,17 log 10 КОЕ, p <0,0001) было достигнуто значительное снижение F. nucleatum после обработки биопленки только 0,05% CHX.

    Рисунок 1 . Коробчатые диаграммы, иллюстрирующие колониеобразующие единицы (КОЕ) пероральных биопленок шести видов после одновременного воздействия 0.от 0,002 мг/мл ДНКазы I+0,1 мг/мл протеиназы K (голубой), до 0,002 мг/мл ДНКазы I+0,1 мг/мл протеиназы K+0,05% хлоргексидина (CHX; розовый), до 0,05% CHX (красный) и до 0,2% CHX (положительный контроль; зеленый). Необработанные биопленки тестировали в качестве отрицательного контроля (темно-синий). Данные для биопленок, обработанных только протеиназой K и ДНКазой I, были взяты из исследования Karygianni et al. (2020a), следуя тому же протоколу формирования биопленки. Уровень статистической значимости указан звездочками ( *** p <0.001).

    Таблица 2 . Среднее значение log ·10 КОЕ всей биопленки (общее количество КОЕ) и шести микроорганизмов, использованных в модели биопленки при обработке 0,05% CHX, по сравнению с комбинированной обработкой ферментами плюс 0,05% CHX отдельно ( n=6).

    Биопленки, обработанные 0,2% CHX, использовались в качестве положительного контроля, и в этой группе не было обнаружено микробного роста. Данные для биопленок, обработанных 0,1% CHX, не показаны на рисунке 1, поскольку не было существенной разницы между этой группой и положительным контролем.

    Изображения CLSM показывают потерю плотности и нарушение структурной целостности биопленок после комбинированной обработки CHX и ДНКазой I/протеиназой K

    Репрезентативные КЛСМ-изображения флуоресцентно окрашенных биопленок после ферментативной, противомикробной (CHX) или комбинированной обработки показаны на рисунке 2. Панели, отмеченные маюскулами (A–E), представляют собой максимальные проекции Z-стеков, а панели, обозначенные минускулами (a–e ) представляют собой трехмерные реконструкции соответствующих Z-стеков. Общая ДНК выглядит зеленой из-за окрашивания смесью йодида YoPro 1 и SYTOX Green, тогда как внеклеточные полисахариды выглядят голубыми из-за окрашивания Calcofluor.Внеклеточная ДНК (вДНК) была окрашена Cy3-стрептавидином, меченным анти-ДНК-антителом, и стала красной, в то время как внеклеточные белки были окрашены в фиолетовый цвет с помощью SYPRO Ruby. Панели 2A/2a представляют необработанные биопленки. Они показывают плотные, неповрежденные биопленки с некоторыми белковыми кластерами. Ферментативно обработанные биопленки (0,002 мг/мл ДНКазы I плюс 0,1 мг/мл протеиназы К) показаны на панелях 2B/2b. Из результатов видно, что обработка обоими ферментами (ДНКаза I, протеиназа К) приводила к образованию менее плотных биопленочных масс с менее заметными белковыми кластерами по сравнению с необработанными биопленками.На панелях 2C/2c показаны биопленки, обработанные 0,5% CHX, а на панелях 2D/2d показаны биопленки, обработанные 0,5% CHX, 0,002 мг/мл ДНКазы I и 0,1 мг/мл протеиназы K. Плотность биопленок, по-видимому, уменьшается после обработки самая низкая концентрация CHX (0,05%) и даже больше после комбинированного лечения с самыми низкими концентрациями CHX и ДНКазы I/протеиназы K. Интересно, что количество внеклеточных полисахаридов, по-видимому, уменьшается по мере последовательного уменьшения плотности клеток на панелях 2B-D. /2b-2d соответственно, хотя в экспериментах мы не использовали никаких ферментов, расщепляющих полисахариды.Панели 2E/2e представляют собой биопленки, обработанные 0,2% CHX (положительный контроль), которые практически не показывают больше клеток и белков.

    Рисунок 2 . Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия (CLSM) Максимальные проекции Z-стека 90 637 (A–E) 90 638 и 3D-реконструкции 90 637 (a–e) 90 638 биопленок, выращенных на дисках HA после обработки или без CHX и/или ДНКазы I + протеиназы K. Тотальную ДНК (зеленый цвет) окрашивали смесью YoPro 1 и SYTOX Green. Внеклеточные полисахариды (синие) окрашивали Calcofluor.Внеклеточную ДНК (кДНК; красный цвет) окрашивали меченным Cy3-стрептавидином анти-ДНК-антитело, а внеклеточные белки (фиолетовые) окрашивали SYPRO Ruby.

    Окрашивание живых/мертвых клеток показывает уменьшение числа клеток после комбинированной обработки CHX и ДНКазой I/протеиназой K

    На рис. 3 представлены репрезентативные CLSM-изображения биопленок, окрашенных с помощью набора Live/Dead BacLight Bacterial Viability Kit, для визуализации относительной жизнеспособности бактериальных популяций в соответствии с целостностью мембран клеток.Краситель SYTO 9 может проникать в клетки как с неповрежденными, так и с поврежденными мембранами, окрашивая их в зеленый цвет, тогда как йодистый пропидий (PI) проникает только в клетки с поврежденными мембранами, окрашивая их в красный цвет. Панели, обозначенные маюскулами (A–E), представляют собой максимальные проекции Z-стеков, а панели, обозначенные минускулами (a–e), представляют собой трехмерные реконструкции соответствующих Z-стеков. Панели 3A/3a представляют собой биопленки, обработанные только 0,5% CHX, тогда как панели 3B/3b представляют биопленки, обработанные комбинацией 0,5% CHX, 0.002 мг/мл ДНКазы I и 0,1 мг/мл протеиназы К. После комбинированного лечения наблюдается очевидное снижение плотности клеток, при этом видны только несколько неповрежденных клеток. Аналогичные результаты показаны на панелях 3C/3c по сравнению с панелями 3D/3d. Биопленки на 3C/3c обрабатывали 0,1% CHX, в то время как биопленки на панелях 3D/3d обрабатывали такой же концентрацией CHX (0,1%) в дополнение к ДНКазе I и протеиназе K. Панели 3D/3d показывают только несколько клеток. агрегаты, так как плотность бактериальных клеток, по-видимому, снижается при комбинированной ферментативной и антимикробной обработке.Поскольку количество КОЕ было уже ниже уровня обнаружения, диаграммы для этих двух групп лечения не показаны на рисунке 1. На панелях 3E/3e показаны биопленки в группе положительного контроля (0,2% CHX). Здесь видны некоторые прикрепленные бактериальные клетки, хотя большинство из них имеют дефекты мембраны. Этот вывод подтверждается подсчетом КОЕ для положительного контроля, который также был ниже уровня обнаружения.

    Рисунок 3 . Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия (CLSM) Максимальные проекции Z-стека 90 637 (A–E) 90 638 и трехмерные реконструкции 90 637 (a–e) 90 638 биопленок, выращенных на дисках HA после обработки или без CHX и/или ДНКазы I + протеиназы K.Биопленки окрашивали с помощью набора LIVE/DEAD BacLight Bacterial Viability Kit, чтобы визуализировать относительную жизнеспособность бактериальных популяций в соответствии с целостностью мембраны клетки. SYTO 9 может проникать в клетки как с неповрежденными, так и с поврежденными мембранами (зеленый цвет), в то время как йодид пропидия проникает только в клетки с поврежденными мембранами (красный цвет). Масштабная линейка: 20 мкм.

    Обсуждение

    В предыдущем исследовании (Karygianni et al., 2020a) с использованием той же модели биопленки был отмечен небольшой, но значительный эффект 0.Было показано, что 002 мг/мл ДНКазы I и 0,1 мг/мл протеиназы К на общее количество КОЕ многовидовых наддесневых биопленок. Однако такая же ферментативная обработка оказала положительное влияние на рост S. mutans и умеренное, но значительное увеличение роста S. oralis по сравнению с необработанной группой (отрицательный контроль). В настоящем исследовании мы пошли дальше, стремясь впервые, насколько нам известно, продемонстрировать комбинированный эффект различных концентраций CHX (0.05, 0,1 и 0,2%) с ферментом ДНКазой I (0,002 мг/мл) и протеиназой K (0,1 мг/мл) на шести видах биопленки in vitro , так называемой «Цюрихской модели биопленки». Применение ферментов, расщепляющих матрикс ЭПС, в сочетании с антимикробными агентами кажется многообещающим подходом к контролю активности биопленки (Koo et al., 2017). Следовательно, целью наших экспериментов была механическая дестабилизация биопленок с помощью применяемых ферментов и одновременное уничтожение микробов путем применения низких концентраций хлоргексидина.Комбинированная обработка ДНКазой I/протеиназой К и самой низкой протестированной концентрацией CHX (0,05%) привела к значительному снижению общего количества микробов и количества КОЕ у пяти из шести видов по сравнению с биопленками, обработанными только 0,05% CHX. Единственное исключение наблюдалось у видов F. nucleatum, , которые уже значительно ингибировались после обработки только CHX (0,05%), но не после комбинированной обработки как ДНКазой I/протеиназой K, так и 0,05% CHX.

    Изображения конфокальной микроскопии (CLSM) показали, что комбинированная обработка привела к менее плотным биопленкам даже после обработки низкой концентрацией CHX, равной 0.05%. Изображения CLSM являются полезным инструментом для визуализации внеклеточного матрикса биопленок, поскольку они могут отображать матрикс в полностью гидратированном состоянии (Schlafer and Meyer, 2017). В целом можно констатировать, что комбинированная ферментативная и антимикробная обработка привела к снижению количества микробов и резкому изменению структурной целостности исследованных биопленок. Напротив, Али Мохаммед и соавт. (2013) не обнаружили значительного влияния протеиназы К или ДНКазы I на формирование и диспергирование биопленок, состоящих из F.nucleatum и Porphyromonas gingivalis выращивали в статической модели биопленки в полистироловых микротитрационных планшетах, хотя они использовали гораздо более высокие концентрации каждого фермента (0,125, 0,25, 0,5 и 1 мг/мл).

    Хорошо известно, что биопленки более устойчивы к антибиотикам и противомикробным агентам, таким как CHX, чем планктонные клетки (Flemming and Wingender, 2010; Xiao et al., 2012). По-видимому, ионные взаимодействия препятствуют диффузии положительно заряженного CHX через отрицательно заряженную матрицу EPS (Hope and Wilson, 2004).Например, Guiot и соавт. (2002) показали, что биопленки Lactobacillus lactis и Stenotrophonas maltophilia образуют барьер для диффузии катионных частиц. В другом исследовании Xiao et al. (2012) исследовали влияние 0,12% CHX на многовидовые биопленки, образованные нулевыми мутантными штаммами gtfBC S. mutans, , что приводит к быстрому уничтожению этих биопленок. Гены gtfB и gtfC кодируют глюкозилтрансферазы B или C, соответственно (GTF B или GTF C), в то время как первый продуцирует водонерастворимые глюканы, а последний продуцирует как водорастворимые, так и нерастворимые глюканы (Aoki et al., 1986; Ханада и Курамицу, 1988). В настоящем исследовании внеклеточные полисахариды не были непосредственной целью лечения, но за счет уменьшения большей части биопленки внеклеточные полисахариды и ЭПС в целом также устраняются. Это особенно заметно на рисунках 2B-D/b-d. Количество прикрепленных микробных клеток уменьшается из-за обработки ДНКазой I/протеиназой К, что, следовательно, приводит к уменьшению продукции внеклеточных полисахаридов. Таким образом, облегчается диффузия CHX в биопленки, что приводит к элиминации оставшихся микробов.Синергический эффект между CHX в низких концентрациях (0,5%) и ДНКазой I/протеиназой K показан на рисунке 1, где показано значительное снижение общего количества КОЕ и количества КОЕ A. oris , V. dispar . , S. mutans , S. oralis, и C. albicans по сравнению с обработкой только 0,5% CHX. Эти результаты показывают, что ЭПС биопленочного матрикса играет важную роль в защите биопленки от противомикробных агентов, что делает его интересной мишенью для антибактериальной терапии (Karygianni et al., 2020b). В другом подходе к разработке комбинированной антибиопленочной терапии чувствительность к четырем различным антибиотикам биопленок, образованных Streptococcus agalactiae , Streptococcus pyogenes, и S. Oralis , выращенных на пористых спеченных стеклянных шариках, исследовали Gonzalez Moreno et al. (2017). Показано, что предварительная обработка биопленок протеиназой К повышала их чувствительность к более низким концентрациям тестируемых антибиотиков по сравнению с биопленками, обработанными только антибиотиками.Ранее было показано, что протеиназа К может изменять состав ЭПС-матрикса биопленок S. aureus , в частности, уменьшая количество белков и даже количество эДНК (Shukla, Rao, 2017). Кроме того, протеиназа К может рассеивать установленные биопленки Listeria monocytogenes , атакуя белки матрикса, используемые для прилипания к поверхности (Nguyen and Burrows, 2014). С другой стороны, как бычья ДНКаза I, так и рекомбинантная ДНКаза I человека (рчДНКаза I, дорназа альфа) ингибируют образование биопленки S.aureus и Staphylococcus epidermidis, рассеивают предварительно сформированные биопленки S. aureus, и повышают их чувствительность к уничтожению биоцидами in vitro (Izano et al., 2008; Kaplan et al., 2012) . Nguyen and Burrows (2014) показали, что ДНКаза I может сокращать биопленки L. monocytogenes , если она присутствует во время ее образования . Бычья ДНКаза I также была способна снижать образование биопленок S. mutans , выращенных на дисках HA, более чем на 1 log КОЕ (Liao et al., 2014). Кроме того, рчДНКаза I может использоваться клинически у пациентов с муковисцидозом для расщепления нейтрофильной ДНК с целью разжижения мокроты и, таким образом, улучшения ее клиренса (Shak et al., 1990; Suri, 2005; Manzenreiter et al., 2012). Кроме того, в одном центре клинического исследования было проверено использование распыленной дорназы альфа вместе с альбутеролом (бронхорасширяющим средством) у пяти пациентов с искусственной вентиляцией легких с диагнозом COVID-19, что привело к снижению потребности в кислороде. После этого все пациенты были успешно экстубированы и могли быть выписаны из больницы (Weber et al., 2020).

    Уже было показано, что комбинированное использование протеиназы K и CHX значительно снижает количество жизнеспособных бактерий в многовидовой модели эндодонтической биопленки с использованием различных протоколов ирригации корневых каналов по сравнению с контрольными группами, которые либо не лечились, либо лечились физиологическим раствором (Niazi et al. др., 2015).

    Используя изложенную методологию, мы продемонстрировали, что комбинация ферментов, расщепляющих матрикс, с антимикробными агентами является многообещающим подходом к разрушению и уничтожению биопленки, и, таким образом, нулевая гипотеза исследования была опровергнута.

    Возможно широкое применение представленного подхода, особенно в области стоматологии, где, например, при ежедневных гигиенических процедурах съемного протеза было бы интересно сочетание ферментативной и биоцидной обработки. Некоторые исследования показали, что сочетание химических методов и чистки зубных протезов более эффективно, чем чистка только щеткой (Baba et al., 2018; Papadiochou and Polyzois, 2018). Было бы интересно посмотреть, как описанный здесь подход к лечению для уменьшения биопленок повлияет на материалы зубных протезов и будут ли другие биоцидные соединения, такие как гипохлорит натрия, иметь такой же или даже лучший эффект.Эти аспекты необходимо исследовать в дальнейших испытаниях. Другое потенциальное использование ферментов для разрушения биопленки в области стоматологии было описано Niazi et al. (2014), когда они исследовали эффекты ферментативного орошения эндодонтической биопленки.

    Также необходимы дальнейшие эксперименты для изучения клинической применимости разработанного нами подхода, особенно в отношении того, есть ли какие-либо побочные эффекты при внутриоральном введении ферментов.

    Заявление о доступности данных

    Необработанные данные, подтверждающие выводы этой статьи, будут предоставлены авторами без неоправданных оговорок.

    Вклад авторов

    KG провели эксперименты, проанализировали данные и написали рукопись. Т.А. критически рассмотрел рукопись. LK и TT придумали идею этой рукописи, участвовали в анализе данных и критически рассмотрели рукопись. Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.

    Финансирование

    Это исследование было поддержано институциональными фондами Цюрихского университета.

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Примечание издателя

    Все претензии, изложенные в этой статье, принадлежат исключительно авторам и не обязательно представляют претензии их дочерних организаций или издателя, редакторов и рецензентов. Любой продукт, который может быть оценен в этой статье, или претензии, которые могут быть сделаны его производителем, не гарантируются и не поддерживаются издателем.

    Благодарности

    Мы хотели бы поблагодарить Патрисию Мартин Перес за ее выдающуюся помощь во время экспериментов, а также за конфокальную микроскопию и анализ данных.Мы также благодарим Центр микроскопии и анализа изображений (ZMB) Цюрихского университета за предоставление конфокального лазерного сканирующего микроскопа (CLSM), используемого для экспериментов.

    Ссылки

    Али Мохаммед, М.М., Нерланд, А.Х., Аль-Харони, М., и Баккен, В. (2013). Характеристика внеклеточного полимерного матрикса и обработка биопленок Fusobacterium nucleatum и Porphyromonas gingivalis ДНКазой I и протеиназой K. J. Oral Microbiol. 5, 20015.doi: 10.3402/jom.v5i0.20015

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Аоки Х., Широза Т., Хаякава М., Сато С. и Курамицу Х.К. (1986). Клонирование гена глюкозилтрансферазы Streptococcus mutans , кодирующего синтез нерастворимого глюкана. Заразить. Иммун. 53, 587–594. doi: 10.1128/iai.53.3.587-594.1986

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Баба Ю., Сато Ю., Овада Г. и Минакучи С.(2018). Эффективность комбинированного метода чистки протезов по сравнению с механическим методом: сравнение чистоты протезов, удовлетворенности пациентов и качества жизни, связанного со здоровьем полости рта. J. Протезирование. Рез. 62, 353–358. doi: 10.1016/j.jpor.2018.01.005

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Цеплик Ф., Якубович Н. С., Бухалла В., Майш Т., Хеллвиг Э. и Аль-Ахмад А. (2019). Устойчивость бактерий ротовой полости к хлоргексидину – есть ли повод для беспокойства? Перед.микробиол. 10:587. doi: 10.3389/fmicb.2019.00587

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Костертон, Дж. В., Левандовски, З., Колдуэлл, Д. Е., Корбер, Д. Р., и Лаппин-Скотт, Х. М. (1995). Микробные биопленки. Анну. Преподобный Микробиолог. 49, 711–745. doi: 10.1146/annurev.mi.49.100195.003431

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Эрскин, Э., Макфи, К.Э., и Стэнли-Уолл, Н.Р. (2018). Функциональные амилоидные и другие белковые волокна в матриксе биопленки. Дж. Мол. биол. 430, 3642–3656. doi: 10.1016/j.jmb.2018.07.026

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Флемминг, Х.-К., Вингендер, Дж., Шевчик, У., Стейнберг, П., Райс, С.А., и Кьеллеберг, С. (2016). Биопленки: эмерджентная форма бактериальной жизни. Нац. Преподобный Микробиолог. 14, 563–575. doi: 10.1038/nrmicro.2016.94

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Гмюр, Р., и Гуггенхайм, Б. (1983).Антигенная гетерогенность Bacteroides intermedius, распознаваемая моноклональными антителами. Заразить. Иммун. 42, 459–470. doi: 10.1128/iai.42.2.459-470.1983

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Гонсалес Морено, М., Трампус, А., и Ди Лука, М. (2017). Синергетическая антибиотическая активность в отношении планктонных и внедренных в биопленку Streptococcus agalactiae, Streptococcus pyogenes и Streptococcus oralis . J. Антимикроб. Чемотер. 72, 3085–3092. doi: 10.1093/jac/dkx265

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Гуггенхайм, Б., Гирцен, Э., Шюпбах, П., и Шапиро, С. (2001). Валидация модели биопленки наддесневого зубного налета in vitro. Дж. Дент. Рез. 80, 363–370. дои: 10.1177/00220345010800011201

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Guiot, E., Georges, P., Brun, A., Fontaine-Aupart, M.P., Bellon-Fontaine, M.Н. и Брианде Р. (2002). Неоднородность диффузии внутри микробных биопленок, определенная методом флуоресцентной корреляционной спектроскопии при двухфотонном возбуждении. Фотохим. Фотобиол. 75:570. doi: 10.1562/0031-8655(2002)075<0570:HODIMB>2.0.CO;2

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Ханада, Н., и Курамицу, Х.К. (1988). Выделение и характеристика гена Streptococcus mutans gtfC, кодирующего синтез как растворимых, так и нерастворимых глюканов. Заразить. Иммун. 56, 1999–2005 гг. doi: 10.1128/iai.56.8.1999-2005.1988

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Хоуп, С.К., и Уилсон, М. (2004). Анализ влияния хлоргексидина на жизнеспособность и структуру пероральной биопленки на основе профилирования жизнеспособности и показателя целостности мембраны. Антимикроб. Агенты Чемотер. 48, 1461–1468. doi: 10.1128/AAC.48.5.1461-1468.2004

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Изано, Э.А., Амаранте, М.А., Хер, В.Б., и Каплан, Дж.Б. (2008). Различная роль поверхностного полисахарида поли-N-ацетилглюкозамина и внеклеточной ДНК в биопленках Staphylococcus aureus и Staphylococcus epidermidis. Заяв. Окружающая среда. микробиол. 74, 470–476. doi: 10.1128/AEM.02073-07

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Якубович, Н. С., Шилдс, Р. К., Раджараян, Н., и Берджесс, Дж. Г. (2013). Жизнь после смерти: критическая роль внеклеточной ДНК в микробных биопленках. Письмо. заявл. микробиол. 57, 467–475. doi: 10.1111/lam.12134

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Каплан Дж. Б., ЛоВетри К., Кардона С. Т., Мадхьястха С., Садовская И., Джаббури С. и соавт. (2012). Рекомбинантная ДНКаза I человека уменьшает биопленку и повышает чувствительность стафилококков к противомикробным препаратам. Дж. Антибиот. 65, 73–77. doi: 10.1038/ja.2011.113

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Карыгианни, Л., Аттин Т. и Турнхер Т. (2020a). Комбинированная обработка ДНКазой и протеиназой нарушает состав и структурную целостность многовидовых биопленок полости рта. Дж. Клин. Мед. 9:983. дои: 10.3390/jcm83

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Карыгианни Л., Рен З., Ку Х. и Турнхер Т. (2020b). Матриксом биопленки: внеклеточные компоненты в структурированных микробных сообществах. Тенденции микробиол. 28, 668–681. doi: 10.1016/j.tim.2020.03.016

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Кавано, Дж. С., Флэк, С. Е., Листер, Дж., Рикер, Э. Б., Ибберсон, С. Б., Дженул, С., и соавт. (2019). Идентификация внеклеточных ДНК-связывающих белков в матриксе биопленки. MBio 10:e01137-19. doi: 10.1128/mBio.01137-19

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Коленбрандер, П. Э., Палмер, Р. Дж., Периасами, С., и Якубович, Н. С. (2010). Оральное многовидовое развитие биопленки и ключевая роль межклеточного расстояния. Нац. Преподобный Микробиолог. 8, 471–480. DOI: 10.1038/nrmicro2381

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ку, Х., Аллан, Р. Н., Хаулин, Р. П., Студли, П., и Холл-Студли, Л. (2017). Ориентация на микробные биопленки: современные и перспективные терапевтические стратегии. Нац. Преподобный Микробиолог. 15, 740–755. doi: 10.1038/nrmicro.2017.99

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Костакиоти, М., Хаджифрангискоу, М.и Халтгрен, С.Дж. (2013). Бактериальные биопленки: развитие, распространение и терапевтические стратегии на заре постантибиотической эры. Гавань Колд Спринг. Перспектива. Мед. 3:а010306. doi: 10.1101/cshperspect.a010306

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Кумар Шукла, С., и Рао, Т.С. (2013). Рассеивание Bap-опосредованной биопленки Staphylococcus aureus с помощью протеиназы K. J. Antibiot. 66, 55–60. doi: 10.1038/ja.2012.98

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Ляо, С., Кляйн, М.И., Хейм, К.П., Фан, Ю., Битун, Дж.П., Ан, С.-Дж., и соавт. (2014). Streptococcus mutans внеклеточная ДНК активируется во время роста в биопленках, активно высвобождается через мембранные везикулы и находится под влиянием компонентов механизма секреции белка. J. Бактериол. 196, 2355–2366. doi: 10.1128/JB.01493-14

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Манценрайтер Р., Кинбергер Ф., Маркос В., Шильхер К., Краутгартнер В.Д., Обермайер А. и соавт. (2012). Ультраструктурная характеристика мокроты при муковисцидозе с помощью атомно-силовой и сканирующей электронной микроскопии. J. Киста. Фиброс. 11, 84–92. doi: 10.1016/j.jcf.2011.09.008

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Марш, PD (2005). Зубной налет: биологическое значение биопленки и образа жизни сообщества. Дж. Клин. Пародонтол. 32(Прил. 6), 7–15. doi: 10.1111/j.1600-051X.2005.00790.x

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Нгуен, У.Т. и Берроуз Л.Л. (2014). ДНКаза I и протеиназа K нарушают образование биопленок Listeria monocytogenes и вызывают рассредоточение ранее существовавших биопленок. Междунар. Дж. Пищевая микробиология. 187, 26–32. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2014.06.025

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Нгуен, П.Т.М., Фальсетта, М.Л., Хванг, Г., Гонсалес-Бегне, М., и Ку, Х. (2014). α-Мангостин нарушает развитие биопленок Streptococcus mutans и облегчает их механическое удаление. PLoS One 9:e111312. doi: 10.1371/journal.pone.0111312

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Ниязи С.А., Аль-Али В.М., Патель С., Фоши Ф. и Манноччи Ф. (2015). Синергический эффект 2% хлоргексидина в сочетании с протеолитическими ферментами на разрушение и уничтожение биопленки. Междунар. Эндод. Дж. 48, 1157–1167. doi: 10.1111/iej.12420

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Ниази, С.А., Кларк, Д., До, Т., Gilbert, S.C., Foschi, F., Mannocci, F., et al. (2014). Эффективность ферментативной ирригации при удалении многовидовой эндодонтической биопленки, испытывающей питательный стресс. Междунар. Эндод. J. 47, 756–768. doi: 10.1111/iej.12214

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Окшевский, М., и Мейер, Р.Л. (2015). Роль внеклеточной ДНК в создании, поддержании и сохранении бактериальных биопленок. Крит. Преподобный Микробиолог. 41, 341–352.дои: 10.3109/1040841X.2013.841639

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Санс, М., Бейтон, Д., Кертис, М.А., Кьюри, Дж.А., Дайдж, И., Доммиш, Х., и соавт. (2017). Роль микробных биопленок в поддержании здоровья полости рта и в развитии кариеса зубов и заболеваний пародонта. Согласованный отчет группы 1 совместного семинара EFP/ORCA о границах между кариесом и заболеваниями пародонта. Дж. Клин. Пародонтол. 44(Прил. 18), С5–С11. дои: 10.1111/jcpe.12682

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Серрано, Дж., Эскрибано, М., Ролдан, С., Мартин, К., и Эррера, Д. (2015). Эффективность дополнительных химических средств против зубного налета при лечении гингивита: систематический обзор и метаанализ. Дж. Клин. Пародонтол. 42(Прил. 16), S106–S138. doi: 10.1111/jcpe.12331

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Шак, С., Капон, Д. Дж., Хеллмисс, Р., Марстерс, С. А., и Бейкер, К. Л. (1990).Рекомбинантная ДНКаза I человека снижает вязкость муковисцидозной мокроты. Проц. Натл. акад. науч. США 87, 9188–9192. doi: 10.1073/pnas.87.23.9188

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Шапиро С., Гирцен Э. и Гуггенхайм Б. (2002). Модель пероральной биопленки in vitro для сравнения эффективности противомикробных ополаскивателей для полости рта. CRE 36, 93–100. дои: 10.1159/000057866

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Шукла, С.К. и Рао, Т. С. (2017). Удаление биопленки Staphylococcus aureus путем нацеливания на внеклеточные белки, связанные с биопленкой. Indian J. Med. Рез. 146, С1–С8. doi: 10.4103/ijmr.IJMR_410_15

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Турнхер, Т., Гмюр, Р., Шапиро, С., и Гуггенхайм, Б. (2003). Массовый транспорт макромолекул в модели наддесневого зубного налета in vitro. Заяв. Окружающая среда. микробиол. 69, 1702–1709. doi: 10.1128/АЕМ.69.3.1702-1709.2003

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Турнхер Т., Рорер Э., Белибасакис Г. Н., Аттин Т. и Шмидлин П. Р. (2014). Удаление статической биопленки вокруг ультразвуковых насадок in vitro. клин. Оральное расследование. 18, 1779–1784 гг. doi: 10.1007/s00784-013-1157-2

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Thurnheer, T., van der Ploeg, J.R., Giertsen, E., and Guggenheim, B. (2006). Влияние дефицита gtfC Streptococcus mutans на смешанные биопленки полости рта in vitro. Кариес Res. 40, 163–171. дои: 10.1159/0000

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Вебер, А. Г., Чау, А. С., Эгеблад, М., Барнс, Б. Дж., и Яновиц, Т. (2020). Распыляемая в линию эндотрахеальная дорназа альфа и альбутерол, вводимые пациентам с COVID-19 на механической вентиляции: серия случаев. Мол. Мед. 26:91. doi: 10.1186/s10020-020-00215-w

    Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

    Уитчерч, К.Б., Толкер-Нильсен, Т., Рагас, П. К., и Маттик, Дж. С. (2002). Внеклеточная ДНК необходима для образования бактериальной биопленки. Наука 295:1487. doi: 10.1126/наука.295.5559.1487

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Xiao, J., Klein, M.I., Falsetta, M.L., Lu, B., Delahunty, C.M., Yates, J.R., et al. (2012). Экзополисахаридная матрица модулирует взаимодействие между трехмерной архитектурой и вирулентностью ротовой биопленки смешанных видов. PLoS Pathog. 8:e1002623. doi: 10.1371/journal.ppat.1002623

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

    Цендер, М., Рехенберг, Д.-К., Турнхер, Т., Люти-Шаллер, Х., и Белибасакис, Г. Н. (2017). FISHing для выявления прилипших к гуттаперче биопленок при гнойном апикальном периодонтите после лечения. Мол. Оральный микробиол. 32, 226–235. doi: 10.1111/omi.12166

    Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

    Антибиопленочная активность хлоргексидина диглюконата in vitro на мембранах на основе полилактида и коллагена | BMC Oral Health

    Мембраны

    Были включены две биорезорбируемые мембраны, одна из которых состояла из полилактида и смеси эфира лимонной кислоты (GUIDOR® Bioresorbable Matrix Barrier; Sunstar Suisse SA; Etoy, Швейцария), а другая представляла собой мембрану, состоящую из перикарда свиньи. коллаген (Jason®, любезно предоставленный botiss material GmbH, Зоссен, Германия).

    Из этих мембран были приготовлены образцы для испытаний размером 5 × 5 мм.

    Раствор диглюконата хлоргексидина

    CHX без добавок был получен из аптеки университетской больницы Берна и приготовлен в виде 0,12% (CHX0,12), 0,06% (CHX0,06) и 0,015% (CHX0,015) CHX.

    Микроорганизмы

    микроорганизмы стрептококк Гордоний ATCC 10558, Actinomyces naeslundii ATCC 12104, Porphyromonas gingivalis ATCC 33277, Tannerella Forsythia ATCC 43037, Fusobacterium nucleatum АТСС 25586 и Parvimonas Micra АТСС 33270.были включены в анализы. S. gordonii и A. naeslundii представляют собой ранних колонизаторов, в то время как P. gingivalis , T. forsythia , F. nucleatum и P. micra явно связаны с периодонтальными заболеваниями. Перед экспериментами все штаммы предварительно культивировали на чашках с агаром Шедлера (Oxoid, Basingstoke, UK) с 5% овечьей крови (JP. Mischler, Швейцария) в течение ночи в анаэробной атмосфере или с 5% CO 2 ( S.gordonii ATCC 10558). Концентрацию бактерий доводили до OD600 нм = 0,5 в 0,9% v/w NaCl (эквивалентно 10 9 бактерий/мл). Затем готовили смешанную суспензию путем смешивания 1 части S. gordonii с 2 частями A. naeslundii (и по 4 части других видов для шестивидовой смеси).

    Клетки

    Фибробласты PDL человека были анонимно собраны у здоровых пародонтологически здоровых пациентов во время регулярного ортодонтического лечения после письменного информированного согласия.Эта процедура одобрена Этическим комитетом Бернского университета. Фибробласты PDL человека помещали в колбы для клеточных культур Т-25, содержащие DMEM (Life Technologies/Invitrogen, Пейсли, Великобритания) с 10% фетальной телячьей сывороткой (FCS; Life Technologies/Invitrogen) для роста до слияния. В начале экспериментов фибробласты всегда находились в 4-6-м пассажах.

    Кератиноциты десен, инактивированные теломеразой (TIGK), любезно предоставленные Р. Ламонтом, Университет Луисвилля, Кентукки, США [15]), поддерживали в среде для культивирования клеток (среда для роста кератиноцитов, KGM-Gold, Lonza, Базель, Швейцария). .Сливающиеся монослои фибробластов PDL и клеток TIGK отделяли с помощью трипсина/ЭДТА, и количество эпителиальных клеток доводили примерно до 10 6 /1 мл среды для культивирования клеток.

    Образование биопленки на мембранах

    Были использованы две биопленки, одна из которых состояла из S. gordonii и A. naeslundii , представляющая собой биопленку, связанную со здоровьем пародонта («здоровая» биопленка), а другая состояла из всех шести видов, представляющих пародонтопатогенная биопленка («пародонтальная» биопленка).Суспензии двух или шести бактериальных штаммов смешивали с питательным бульоном (бульон Уилкинса Чалгрена + 5% овечьей крови) в соотношении 1:19. Затем испытуемые образцы сначала погружали в 25% раствор сыворотки (Sigma-Aldrich, Buchs, Швейцария). а затем в CHX0,12 или CHX0,06 на 1 мин перед помещением в 24-луночные планшеты и воздействием бактериальной суспензии. После инкубации в течение 2 ч и 8 ч в анаэробных условиях биопленки удаляли с поверхности. После смешивания пипеткой делали серийные разведения и оценивали общее количество КОЕ.Далее, в случае биопленок из шести видов, с помощью ПЦР в реальном времени определяли нагрузки P. gingivalis и T. forsythia [16].

    Во второй серии экспериментов мембраны обрабатывали, как и раньше, но после 8-часовой инкубации мембраны снова подвергали воздействию соответствующего раствора хлоргексидина диглюконата или 0,9 мас./об. NaCl (контроль) в течение 1 мин. Затем раствор удаляли и снова добавляли бактериальную взвесь на 16 ч. В дальнейшем процедуру повторяли два раза в день, имитируя клиническое полоскание полости рта раствором хлоргексидина диглюконата два раза в день.Через три дня количество бактерий определяли, как описано выше.

    Адгезия фибробластов PDL и эпителиальных клеток десны (TIGK)

    Образцы мембран погружали в 25% раствор сыворотки, а затем в раствор хлоргексидина диглюконата в трех концентрациях (CHX0,12, CHX0,06, CHX0,015 (для имитации возможный градиент разбавления) или 0,9 мас./об. NaCl (контроль)) в течение 1 мин. После этого образцы помещали в 24-луночные планшеты и добавляли фибробласты PDL или TIGK.Мембраны инкубировали с фибробластами PDL с 5% CO 2 в течение 72 часов или с TIGK в течение 24 часов (каждый примерно 10 5 клеток / мм 2 ), прежде чем подсчитывали количество прикрепленных фибробластов.

    Влияние микроорганизмов на адгезию фибробластов PDL и TIGK

    Эксперименты с фибробластами PDL и клетками TIGK повторяли в присутствии бактериальных лизатов. Бактериальные суспензии двух или шести видов готовили, как описано выше, и доводили до концентраций 10 7 /мл, 10 8 /мл и 10 9 /мл.Затем суспензии подвергали воздействию ультразвука мощностью 160 Вт в течение 10 мин и фильтровали через мембраны с размером пор 400 мкм. Наконец, в среду для культивирования клеток добавляли проточный или 0,9% масс./об. NaCl в соотношении 1:9. ) были выбраны для изучения потенциальной интерференции обоих компонентов. Обработку барьерных мембран и другие этапы обработки проводили, как описано выше.

    Экспрессия IL-8 и TGFβ1 в фибробластах PDL

    Кроме того, потенциальные эффекты CHX и бактериальных лизатов на фибробласты PDL, которые имеют решающее значение для заживления десневых ран, были проанализированы на уровне экспрессии генов. Мембраны погружали перед добавлением фибробластов PDL в CHX0,015 или добавляли лизаты бактериальных суспензий (10 8 /мл). После обработки клеток РНК экстрагировали с помощью набора innuPREP RNA Mini Kit (Analytic Jena, Jena, Germany) и кДНК, полученную из 100 нг общей РНК, с использованием системы обратной транскрипции GoScript™ (Promega, Мэдисон, Висконсин, США) согласно инструкциям производителей.После этого ПЦР в реальном времени с использованием GoTaq® qPCR Master Mix (Promega) с соответствующими праймерами использовали для количественного определения экспрессии мРНК IL-8 и TGFβ1. Праймеры для IL-8 (праймер: вперед: 5′-CACTGCGCCAACACAGAAAT-3′, ред.: 5′-TGGCCCTTGGCCTCAATTTT-3′; # BC013615.1) и TGFβ1 (праймер: вперед: 5′-CCAGATCCTGTCCAAGCTGC-3′ ; rev.: 5′-GCTGAGGTATCGCCAGGAAT-3′; # NM_000660.6) были разработаны с использованием PRIMER-BLAST, являющегося инструментом для поиска специфических праймеров (Национальный центр биотехнологической информации, Национальная медицинская библиотека США, Бефседа, США).GADPH [17] служил эталонным геном.

    Статистический анализ

    Все эксперименты были выполнены в четырех независимых повторах не менее чем в двух сериях. Статистические анализы основаны на log10 количества бактерий (общее количество колониеобразующих единиц (КОЕ) и количество выбранных пародонтопатогенов), а также на количестве прикрепленных клеток/мм 2 .

    Беспараметрические тесты применялись для статистического анализа. После проведения H-критерия Крускала-Уоллиса для сравнения всех групп, U-критерий Манна-Уитни определил различия с контролем в каждой.Только для анализа экспрессии мРНК использовали t-критерий Стьюдента. Уровень значимости был установлен на p  = 0,05. Использовали программное обеспечение SPSS 24.0 (IBM SPSS Statistics, Чикаго, Иллинойс, США).

    Ингибирующие и разрушающие свойства глюконата хлоргексидина на одно- и многовидовых пероральных биопленках | Джундишапурский журнал микробиологии

    Аннотация

    Фон:
    Хлоргексидина глюконат (CHX) является наиболее распространенным противомикробным средством, используемым против оральных патогенов, однако информация о его способности ингибировать и разрушать анаэробные одно- и многовидовые биопленки относительно неизвестна.

    Цели:
    Цель этого исследования состояла в том, чтобы проверить эффективность CHX в отношении его свойств ингибирования и разрушения биопленки с использованием анализа кристаллического фиолетового.

    Материалы и методы:
    Анализы биопленок проводились на отдельных и множественных видах четырех оральных патогенов: Streptococcus (S.) mutans, Fusobacterium (F.) nucleatum, Aggregatibacter (A.) actinomycetemcomitans и Porphyromonas (P.) gingivalis.

    Результаты:
    Streptococcus mutans, Fusobacterium nucleatum и образование многовидовых биопленок ингибировались более чем в 90% случаев при концентрациях 3-12 мг/л.CHX проявлял сильную разрушающую активность (> 65%) в отношении однодневных биопленок A. actinomycetemcomitans и P. gingivalis.

    Выводы:
    В заключение, CHX был высокоэффективным ингибитором биопленки S.mutans, F. nucleatum и многовидовые биопленки, но оказывали минимальное влияние на P. gingivalis и A. actinomycetemcomitans. И наоборот, CHX проявлял разрушающие свойства в отношении поздних колонизаторов в биопленках одного вида, но не в отношении ранних колонизаторов и многовидовых биопленок.

    Ключевые слова

    Биопленки Антимикробный агент Хлоргексидин глюконат пародонтит

    Полный текст

    Полный текст доступен в формате PDF

    © 2012, Автор(ы).Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с условиями международной лицензии Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 (http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/), которая разрешает копирование и распространение материала только в некоммерческих целях. , при условии правильного цитирования оригинальной работы.

    In vitro Влияние ограниченного воздействия субтерапевтических концентраций хлоргексидина глюконата на связанные с адгезией признаки видов Candida в полости рта — Полный текст — Медицинские принципы и практика 2016, Vol.25, № 4

    Цель: Объектив: Candida albicans и его не- albicans аналогов, таких как C. Tropicalis , C. Krusei , C. Glabrata и C. Dubliniensis , являются основными этиологическими агентами кандидоза полости рта. Их адгезия к клеткам буккального эпителия (BEC), акриловым поверхностям зубных протезов (DAS) и гидрофобность клеточной поверхности (CSH) являются признаками, связанными с колонизацией дрожжами и инфекцией.Хлоргексидина глюконат (ХГ) — антисептик, широко используемый в стоматологии. При введении разбавляющий эффект слюны и очищающий эффект мускулатуры полости рта снижают его биодоступность, снижая его эффективность. Таким образом, при внутриротовом введении Candida подвергается кратковременному воздействию высоких концентраций ХГ, после чего, вероятно, становится субтерапевтическим. Таким образом, было исследовано влияние ХГ на адгезию к БЭК, ДАС и ХСГ различных пероральных видов Candida после кратковременного воздействия трех субтерапевтических концентраций ХГ. Материалы и методы: Десять оральных изолятов каждого из пяти видов Candida , полученных в Кувейте из образцов полоскания рта, подвергались воздействию 0,00125, 0,0025 и 0,005% CG в течение 30 мин. Затем определяли адгезию дрожжей к BEC, DAS и CSH. Данные были проанализированы с использованием t-тестов ANOVA Dunnett. Результаты: Воздействие самого низкого разведения (0,00125%) CG не вызывало заметного коллективного подавления всех трех оцениваемых признаков адгезии.Воздействие 0,0025% CG снижало адгезию к BEC, DAS и CSH видов Candida на 50,89, 40,79 и 24,58% соответственно (виды p Candida на 64,68, 54,59 и 50% соответственно (p Выводы: Кратковременное воздействие субтерапевтические концентрации CG подавляли адгезию к BEC, DAS и CSH пероральных видов Candida , что указывает на возможную фармакодинамику, которая может усиливать его антисептические свойства. Candida albicans и не относящиеся к albicans виды Candida часто встречаются в популяции больных с патологиями [1].Такие оральные дрожжевые инфекции и уровень слюны Candida тесно коррелируют со степенью иммуносупрессии хозяина и являются предикторами прогрессирования основного заболевания, особенно при ВИЧ-инфекции [1]. В глобальном масштабе C. albicans , безусловно, являются наиболее распространенными из всех видов Candida [1]. Однако инфекции, вызванные не- albicans Candida видами, такими как C. tropicalis , C. krusei , C. glabrata и C.dubliniensis , становятся все более распространенными [1]. Считается, что эти организмы становятся патогенами из-за их различных вирулентных свойств. Например, C. krusei по своей природе устойчив к азолу, в то время как C. glabrata , как сообщается, приобретает устойчивость к азолу, вызывая серьезные и персистирующие инфекции у пациентов с ослабленным иммунитетом [2,3]. Точно так же C. tropicalis часто приобретается из оральных ниш ВИЧ-инфицированных пациентов [1]. Кроме того, С.dubliniensis в настоящее время общепризнан как близкий родственник C. albicans с почти такими же вирулентными свойствами [1,3]. У этих дрожжей, полученных от ВИЧ-инфицированных, была обнаружена устойчивость к флуконазолу, а также устойчивость к более новым противогрибковым препаратам, вориконазолу и итраконазолу [4,5,6]. В целом, у клинических изолятов Candida была зарегистрирована резистентность почти ко всем противогрибковым препаратам, что указывает на острую необходимость замены или добавления противогрибковых препаратов [7].

    Адгезия Candida к слизистой оболочке полости рта человека является важной предпосылкой для процесса колонизации и инфекции, и была продемонстрирована прямая корреляция между усиленной адгезией дрожжей к слизистой оболочке и их инфекционностью [8]. Также считается, что способность видов Candida прилипать к акриловым поверхностям зубных протезов (DAS) важна в патогенезе Candida -индуцированного стоматита зубных протезов [8,9]. Относительная гидрофобность клеточной поверхности (CSH) Candida , которая изменяет первоначальный контакт между грибком и хозяином, считается важным небиологическим признаком, связанным с кандидозной адгезией либо к биотическим, либо к абиотическим поверхностям, таким как ротовые протезы [10].Также было отмечено, что гидрофобные Candida более патогенны, чем их относительно более гидрофильные аналоги [10]. Исследования также показали положительную корреляцию между относительным CSH Candida и его адгезией к эпителиальным клеткам ротовой полости (BEC), а также DAS [11,12].

    Хлоргексидина глюконат (ХГ) назначают в качестве антисептического средства для полоскания рта в обычной стоматологии из-за его широкого антимикробного спектра, который также включает видов Candida [13].CG используется в качестве дополнения к традиционным противогрибковым средствам при лечении оральных дрожжевых инфекций, включая Candid a-ассоциированный зубной стоматит [14]. Антимикотическая активность CG была показана как in vivo, так и in vitro, хотя большинство этих тестов было сосредоточено на C . albicans видов [14]. Например, экспозиция C . Было показано, что изоляты albicans или BEC до 0,2% CG подавляют кандидозную приверженность к BEC у здоровых людей или диабетиков [15].Другие показали, что с C. albicans и его близким фенотипическим родственником C. dubliniensis CG эффективно подавляет CSH и адгезию к DAS [16,17]. Поэтому, подавляя адгезию Candida к BEC, DAS и их CSH, жидкости для полоскания рта, содержащие CG, могут снизить патогенный потенциал дрожжей.

    Несмотря на то, что фармакодинамика средств для полоскания рта широко не изучалась, известно, что после полоскания рта CG этот антисептик почти полностью удаляется из полости рта в течение первого часа благодаря разбавляющему действию слюны и очищающему эффекту. воздействие на мускулатуру полости рта, что снижает его терапевтическую эффективность [18].В результате, Candida , вероятно, кратковременно подвергается воздействию высоких концентраций ХГ сразу после введения и, в конечном счете, воздействию остаточных низких субтерапевтических концентраций. Ранее о влиянии таких низких концентраций CG на адгезию различных пероральных видов Candida , полученных из одного географического региона, к BEC, DAS и CSH не сообщалось. Следовательно, основной целью текущего исследования была оценка адгезии к пяти различным пероральным видам Candida (C . альбиканс , С . тропический , С . крузи , С . glabrata и C . dubliniensis) , полученный в стоматологической клинике Кувейтского университета, для BEC, DAS и относительного CSH после ограниченного воздействия трех различных субтерапевтических концентраций CG (т.е. 0,00125, 0,0025 и 0,005%).

    Материалы и методы.

    Организмы.По десять изолятов

    C . albicans и не- albicans изученных видов Candida C . крузи , С . тропический , С . glabrata и C . dubliniensis — (т.е. всего 50 изолятов Candida ). Идентификация изолятов была подтверждена путем наблюдения за цветом колоний на среде CHROMagar Candida (Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockeysville, Md., США) и определение профилей усвоения углеводов с помощью наборов для идентификации Candida
    API 20C AUX (bioMérieux Vitek Inc., Hazelwood, Миссури, США). Также наблюдали образование видов Candida шероховатых колоний с гифальными каймами и хламидоспорами на упрощенном подсолнечном агаре [19].

    Противогрибковые препараты и среды

    0,2% жидкость для полоскания рта CG (Corsodyl, GlaxoSmithKline, Brentford, UK) растворяли в стерильном фосфатно-солевом буфере (PBS) при pH 7.2. После этого непосредственно перед каждым экспериментом готовили растворы трех разных концентраций антисептика (0,00125, 0,0025 и 0,005%), как описано ранее [16,17].

    Приготовление суспензии клеток Candidal для анализа адгезии к BEC, анализа DAS и анализа CSH

    Для приготовления клеточной суспензии использовали ранее описанный метод с небольшими изменениями [16,17]. Вкратце, клеток Candida , сохраненных на декстрозном агаре Сабуро, инокулировали на свежие чашки и инкубировали в течение ночи при 37°С в течение 24 часов.Организмы собирали и затем готовили клеточную суспензию с использованием стерильного PBS при 520 нм для получения оптической плотности 1,5. После этого 0,5 мл этой клеточной суспензии смешивали с 2 мл стерильного PBS (контроль) и 2 мл PBS/CG (испытание), получая таким образом клеточную суспензию из 10 6 клеток мл -1 в каждом анализе. трубка. Затем пробирки инкубировали при 37°С в течение 30 мин. После этого ограниченного воздействия лекарства удаляли путем разбавления с использованием стерильного PBS.Для этого проводили три цикла разведения стерильным PBS с последующим центрифугированием всего раствора в течение 10 мин при 3000 г . После этого супернатант полностью удаляли, а оставшиеся осадки клеток ресуспендировали в 15 мл стерильного PBS. Эта процедура удаления препарата путем разбавления применялась в предыдущих исследованиях и показала снижение концентрации ХГ в 10 000 раз, что привело к устранению любого эффекта переноса ХГ после его удаления [16,17,20, 21].Жизнеспособные количества контрольной и испытуемой групп также были получены после удаления лекарственного средства путем оценки количества колониеобразующих единиц.

    Анализ адгезии к БЭК

    Для анализа адгезии к БЭК применяли ранее использовавшийся метод [20] с небольшими изменениями. Вкратце, БЭК человека от 4 взрослых (сотрудников лаборатории) получали с помощью стерильных ватных тампонов путем мягкого протирания внутренней стороны правой и левой сторон слизистой оболочки рта. После этого БЭК диссеминировали в стерильном PBS.Суспензию объединенных БЭК от четырех добровольцев промывали в PBS и любые прикрепившиеся микроорганизмы удаляли центрифугированием при 3500×90×106 g×90×107 в течение 10 мин. BEC ресуспендировали в стерильном PBS для получения концентрации 1×10 5 клеток/мл при подсчете гемоцитометром. Для выполнения процедуры адгезии 0,75 мл БЭК и 0,75 мл суспензии клеток Candida после кратковременного воздействия ХГ осторожно смешивали в пластиковых пробирках и инкубировали при 37°С в течение 1 часа.Суспензию Candida /BEC разбавляли 5 мл стерильного PBS. БЭК собирали на поликарбонатные фильтры и осторожно промывали стерильным PBS для удаления любых клеток Candida , не прикрепленных к БЭК. Затем каждый поликарбонатный фильтр помещали на предметное стекло и осторожно удаляли через 10 с. Предметное стекло сушили на воздухе, окрашивали по Граму и готовили для подсчета БЭК. Количественную оценку количества прикрепившихся клеток Candida проводили под световой микроскопией при увеличении ×400.Для подсчета было воспринято пятьдесят последовательных БЭК. клеток Candida , прилипших к БЭК, выражали как количество дрожжей на 50 БЭК. Candida , прикрепленные к складчатым или перекрывающимся и слипшимся BEC, не учитывались.

    Анализ адгезии к DAS

    Акриловые полоски для анализа адгезии были приготовлены, как описано ранее [11,12]. Прозрачный самополимеризующийся акриловый порошок (1,5 г порошка полиметилметакрилата) наносили на предметное стекло, покрытое алюминиевой фольгой (2.5 × 7,5 см). Один миллилитр мономерной жидкости (Dentsply Ltd., Вейбридж, Великобритания) выливали на поверхность предметного стекла и сразу же помещали второе такое же предметное стекло поверх полимеризующейся смеси, и предметные стекла надежно закрепляли с обоих концов двумя зажимами. . После отверждения в течение 30 минут предметные стекла разделяли. Полученные акриловые полоски разрезали на квадраты 5 × 5 мм, затем погружали в дистиллированную воду на 1 неделю для выщелачивания избытка мономера и промывали проточной водой в течение 3 часов.Затем полоски дезинфицировали погружением в 70% спирт и промывали стерильной дистиллированной водой. Затем их обрабатывали ультразвуком в течение 20 минут для удаления любых загрязнений и артефактов с поверхностей, снова промывали в стерильной дистиллированной воде, сушили и использовали для анализа адгезии. Последующий анализ адгезии проводили, как описано ранее [11,12]. Вкратце, используя асептическую технику, акриловые полоски помещали вертикально в лунки стерильного серологического планшета. После этого после кратковременного воздействия CG в каждую лунку добавляли 400 мкл суспензии клеток Candida , полностью покрывая акриловые полоски.После этого всю сборку помещали в инкубатор на 1 ч при 37°С при легком встряхивании со скоростью 120 об/мин. Затем полоски в асептических условиях извлекали из лунок и трижды промывали путем осторожного погружения в стерильный PBS, что помогло удалить свободно прикрепленные клетки Candida . Затем полоски высушивали и окрашивали с использованием модифицированного красителя по Граму без контрастного окрашивания. После сушки на воздухе при комнатной температуре их помещали на предметные стекла с глицерином и определяли количество адгезивных Candida .Клетки Adherent Candida в 20 полях зрения для каждой полоски (0,25 мм 2 на поле) определяли с помощью светового микроскопа при увеличении ×400, и результаты выражали как клеток Candida /мм 2 , как ранее [21]. Большинство прикрепившихся клеток Candida находились на стадии бластоспоры (клетки округлой формы), некоторые с дочерними клетками и лишь очень немногие с гифами или псевдогифами. Для стандартизации подсчетов использовали следующие ранее использовавшиеся параметры: почкующиеся дрожжи считали элементарной клеткой, если дочерняя клетка была меньше материнской клетки, а гифу считали одиночной клеткой [21].

    Относительный анализ CSH

    Для оценки CSH на пероральных видах Candida использовали водно-углеводородный анализ, основанный на двухфазном разделении растворов, как описано ранее [16,17]. Вкратце, 5 мл суспензии клеток Candida после воздействия CG перемешивали в вортексе. После этого измеряли его оптическую плотность при 520 нм. Затем к клеточной суспензии добавляли 1 мл ксилола. Пробирки помещали в инкубатор при 37°С на 10 мин для уравновешивания.После этого его перемешивали в вортексе в течение 30 с и снова помещали в инкубатор еще на 30 мин для разделения водной фазы и ксилола. Нижнюю водную фазу пробы тщательно отбирали пипеткой и помещали в стерильную пробирку. Путем барботирования воздуха через водную суспензию со скоростью 180 мл в минуту в течение 2 мин удаляли следы загрязняющего ксилола, которые могли быть перенесены в пипетку или связаны с клетками Candida . Оптическую плотность (оптическую плотность) измеряли при 520 нм после перемешивания в вортексе в течение 5 с для разрушения и ресуспендирования любых агрегатов, которые могли образоваться.Относительный CSH выражали как процент снижения оптической плотности суспензии, как это делалось в предыдущих исследованиях [16,17]. Все тесты проводились в двух повторностях в трех отдельных случаях.

    Статистический анализ

    Данные, полученные для трех различных концентраций CG по адгезии к BEC, DAS и CSH, были проанализированы с использованием t-критерия ANOVA Dunnett, при этом одна группа рассматривалась как контрольная (группа, не подвергавшаяся воздействию CG), по сравнению с которой все другие группы (воздействующие КГ) сравнивались.Кроме того, было проанализировано среднее процентное снижение двух концентраций (т.е. 0,005 и 0,0025%) протестированных изолятов Candida , которые оказывали общее значительное влияние на подавление адгезии к BEC, DAS и CSH, между C. albicans и не- albicans видов Candida .

    Результаты

    Средняя адгезия к БЭК 50 изолятов Candida , не подвергшихся воздействию ХГ, составила 179,4 ± 21,81 (дрожжи/50 БЭК), тогда как после ограниченного воздействия 0.00125, 0,0025 и 0,005% концентрации ХГ наблюдалось снижение адгезии до 152, 88,10 и 63,36 соответственно (табл. 1). Следовательно, по сравнению с контролем заметное снижение адгезии к БЭК всех изолятов наблюдалось после воздействия 0,005% ХГ с процентным снижением на 64,68% (р <0,001). Подавляющее действие на адгезию БЭК при воздействии 0,0025% разведения антисептика также было значительным (p < 0,001), хотя и ниже, чем при более высокой концентрации (50.89%; Таблица 1). В целом, несмотря на значительное снижение адгезии к БЭК у дрожжей, подвергшихся воздействию 0,00125% ХГ, этот эффект составил всего 15,27%.

    Таблица 1

    Адгезия различных пероральных видов Candida к BEC ( Candida/ 50 BEC) после кратковременного воздействия трех концентраций CG 46,80 ± 0,39 (дрожжи/мм 2 ), тогда как после кратковременного воздействия 0.00125, 0,0025 и 0,005% концентрации ХГ наблюдалось снижение адгезии до 43,34, 27,71 и 21,25 соответственно (табл. 2). Таким образом, по сравнению с контролем после воздействия 0,005% ХГ наблюдалось отчетливое снижение адгезии к БЭК всех изолятов на 54,59% (p < 0,001). Аналогичным образом подавляющее влияние на адгезию ДАС после воздействия 0,0025% разведения антисептика также было значительным (p < 0,001), хотя и ниже, чем при более высокой концентрации (40.79%; Таблица 2). Несмотря на то, что наблюдалось значительное снижение адгезии к DAS на 7,39% у дрожжей, подвергшихся воздействию 0,00125% CG, оно не было очень заметным по сравнению с более высокими концентрациями.

    Таблица 2

    Адгезия различных пероральных видов Candida к DAS (клеток/мм 2 ) после кратковременного воздействия трех концентраций CG

    тогда как после ограниченного воздействия 0.0,00125, 0,0025 и 0,005% концентрации ХГ наблюдалось снижение значений КСГ до 26,51, 20,83 и 13,81 соответственно (табл. 3). Таким образом, по сравнению с контролем после воздействия 0,005% CG наблюдалось поразительное снижение CSH у всех изолятов с процентным снижением на 50% (p < 0,001). Подавляющее действие на ЦСГ после воздействия 0,0025% разбавленного антисептика также было значительным (p < 0,001) по сравнению с таковым у необработанного контроля, хотя и значительно ниже, чем при более высокой концентрации (24.58%; таблицу 3). Хотя наблюдалось очень небольшое снижение CSH у всех дрожжей, подвергшихся воздействию 0,00125% CG (4,02%; таблица 3), супрессивный результат не был значительным.

    Таблица 3

    Относительный CSH различных видов Candida при пероральном приеме после кратковременного воздействия трех концентраций CG

    При процентном снижении двух концентраций (т. рассматривали все изоляты Candida , было отмечено, что подавляющее действие на C.albicans была наименьшей по сравнению с аналогами , не относящимися к albicans (таблицы 1, 2, 3). Например, снижение адгезии к BEC изолятов C. albicans составило 58,41% по сравнению с 65,53-68,60% для не- albicans видов Candida после воздействия 0,005% CG. Аналогично, снижение DAS-адгезии изолятов C. albicans составило 41,6% по сравнению с 55,88-58,84% для не- albicans видов Candida после воздействия 0.005% ЦГ. Точно так же снижение CSH у изолятов C. albicans составило 41,47% по сравнению с 50,54-53,57% для не- albicans видов Candida при такой концентрации. Это различие было значительным между C. albicans и не- albicans видами Candida (p < 0,05 до p < 0,001). Снижение адгезии к BEC у изолятов C. albicans составило 45,51% по сравнению с 50,10-55,55% для не- albicans видов Candida после воздействия 0.0025% ЦГ. Аналогично, уменьшение количества изолятов C. albicans при адгезии к DAS составило 29,7% по сравнению с 41,35-43,92% для не- albicans видов Candida после воздействия 0,0025% CG. Точно так же снижение CSH изолятов C. albicans составило 19,61% по сравнению с 23,64-28,26% для не- albicans видов Candida при этой концентрации. Это различие также было значительным между C. albicans и не- albicans видами Candida (p < 0.001).

    Обсуждение

    В этом исследовании кратковременное воздействие субтерапевтических концентраций CG подавляло кандидозную приверженность к BEC и DAS у всех протестированных видов Candida . Выявленное общее значительное подавление адгезии Candida к BEC и DAS из-за CG связано с фармакодинамическими взаимодействиями между антисептиком и клеточной стенкой Candida . Сканирование и электронно-микроскопические наблюдения показали, что противогрибковый эффект ХГ, скорее всего, был обусловлен потерей цитоплазматических компонентов наряду с коагуляцией нуклеопротеидов и связанными с этим морфологическими изменениями в структуре клеточной стенки [23].Кроме того, также наблюдалось снижение почкования или прорастания клеток Candida [23]. Интересно, что другие производные хлоргексидина, такие как диацетат хлоргексидина, также вызывали цитологические изменения у видов дрожжей, таких как Saccharomyces cerevisiae , включая плотные и зернистые цитоплазматические компоненты, удаление внутренних компонентов из клеточной стенки и общую потерю типичного клеточного строения. организации [24]. Более того, вызванная хлоргексидином утечка K + и пентозного материала из S.cerevisiae и лизис протопластов также был задокументирован [25]. Принимая во внимание эти вероятные эффекты ХГ и других производных хлоргексидина на виды дрожжей, разумно предположить, что, воздействуя как на структуру клеточной стенки, так и на другие клеточные события, ХГ может объяснить подавление адгезии Candida к BEC как также ДАС.

    Микробные структуры, которые вносят вклад в CSH, включают белки внешней мембраны, липопротеины, фосфолипиды, липополисахариды и фимбрии [26,27].Следовательно, было показано, что препараты, которые нарушают эти структурные особенности, снижают CSH микробов [16,17]. В случае C. albicans было показано, что CSH хорошо коррелирует с концентрацией «фибрилл» во внешнем слое клеточной стенки [26,27]. Кроме того, противогрибковый эффект этого антисептика, скорее всего, является результатом потери компонентов цитоплазмы и коагуляции нуклеопротеидов и связанных с этим морфологических изменений в структуре клеточной стенки Candida [23].Следовательно, заманчиво предположить, что даже низкие субтерапевтические концентрации ХГ могут в некоторой степени влиять на структуру клеточной стенки и подавлять CSH видов Candida .

    При сравнении относительной межвидовой изменчивости воздействия ХГ было очевидно, что антисептик оказывал наименьшее влияние на адгезию к БЭК, ДАС и относительный ХСГ C. albicans при воздействии двух концентраций (т.е. 0,005 и 0,0025%) ХГ. Следовательно, оказывается, что из всех изученных видов Candida C.albicans , чтобы быть наиболее устойчивым по сравнению с не относящимися к albicans видами Candida . Это наблюдение еще больше подтверждает тот факт, что C. albicans является наиболее вирулентным и широко распространенным из всех видов Candida [28].

    Текущее исследование показало, что воздействие ХГ на виды Candida даже в субтерапевтических дозах подавляет три основных вирулентных признака дрожжей, которые определяют их колонизацию слизистой оболочки.В недавнем отчете, что важно для географического региона, указано, что C . dubliniensis был наиболее распространенным из не- albicans оральных Candida видов, выделенных из Кувейта [19]. Имеются также сообщения о появлении резистентности к 5-фторцитозину, мощному противогрибковому средству, аналогичному ДНК, у изолятов Candida из Кувейта и прилегающих регионов Ближнего Востока [29,30]. Кроме того, резистентность почти ко всем противогрибковым препаратам зарегистрирована практически у всех клинических видов Candida [2, 3, 4, 5, 6, 7, 28, 29, 30].Возникновение такой резистентности имеет важные терапевтические последствия и указывает на необходимость возможных альтернативных противогрибковых стратегий. В этом контексте наши результаты, по-видимому, еще больше подтверждают использование ХГ in vivo в качестве вспомогательного средства при лечении кандидоза полости рта.

    Заключение

    В этом исследовании CG индуцировал подавление адгезии к BEC, DAS и CSH у пяти различных видов Candida , полученных из одного географического места на Ближнем Востоке.

    Благодарности

    Эта работа была поддержана исследовательским грантом Кувейтского университета No.DB 01/13 и частично поддерживается грантом проекта общего фонда Кувейтского университета № GD 01/11. Благодарим за техническую поддержку и советы доктора J.A.M.S. Джаятилаке, факультет стоматологических наук, Университет Перадения, Шри-Ланка, д-р Бобби Джозеф, г-жа Прити Джон и г-жа Лавли Джеймс, стоматологический факультет, Кувейтский университет, Кувейт. Вклад доктора П. Шармы в статистический анализ данных высоко ценится.

    Лицензия открытого доступа: Это статья открытого доступа, лицензированная в соответствии с условиями Creative Commons Attribution-NonCommercial 3.0 Неперенесенная лицензия (CC BY-NC) (www.karger.com/OA-license), применимая только к онлайн-версии статьи. Распространение разрешено только в некоммерческих целях.
    Дозировка препарата: авторы и издатель приложили все усилия, чтобы гарантировать, что выбор препарата и дозировка, указанные в этом тексте, соответствуют текущим рекомендациям и практике на момент публикации. Тем не менее, в связи с продолжающимися исследованиями, изменениями в правительственных постановлениях и постоянным потоком информации, касающейся лекарственной терапии и реакций на лекарства, читателю настоятельно рекомендуется проверять вкладыш в упаковке для каждого лекарства на предмет любых изменений в показаниях и дозировке, а также для дополнительных предупреждений. и меры предосторожности.Это особенно важно, когда рекомендуемый агент является новым и/или редко используемым лекарственным средством.
    Отказ от ответственности: заявления, мнения и данные, содержащиеся в этой публикации, принадлежат исключительно отдельным авторам и участникам, а не издателям и редакторам. Появление рекламы и/или ссылок на продукты в публикации не является гарантией, одобрением или одобрением рекламируемых продуктов или услуг или их эффективности, качества или безопасности.Издатель и редактор(ы) отказываются от ответственности за любой ущерб, нанесенный людям или имуществу в результате любых идей, методов, инструкций или продуктов, упомянутых в содержании или рекламе.